赖氨酸发酵机制.pptVIP

第三章 黄色短杆菌Lys合成调节机制 黄色短杆菌生物合成Lys调节机制 酶3活性比酶2高15倍,代谢优先生成高丝氨酸 酶4活性比高丝氨酸激酶高,代谢优先向蛋氨酸方向进行 蛋氨酸过量反馈阻遏酶4,3的合成 异亮氨酸过量反馈抑制酶5的活性 苏氨酸过量反馈抑制酶3的活性,并且与过量赖氨酸协同抑制酶1的活性 积累赖氨酸的菌株特性 优先合成的转换-渗漏缺陷型的筛选:通过诱变降低高丝氨酸脱氢酶的活性-高丝氨酸渗漏缺陷型,代谢流转向优先合成赖氨酸. 高丝氨酸脱氢酶活性很低,合成的苏氨酸少,不足以与赖氨酸共同对天冬氨酸激酶活性产生协同反馈抑制作用,从而可以积累赖氨酸. 营养缺陷型的选育:A)通过基因突变使酶3失去活性得到高丝氨酸营养缺陷型,切断向苏氨酸方向的代谢流.B)在培养液中加入限制量的高丝氨酸(或苏氨酸和蛋氨酸). 抗结构类似物的选育 结构类似物特征: 1 结构与正常代谢物相似. 2 能替代类似物与变构酶的变构部位结合. 3 不参加细胞的新陈代谢(如合成蛋白质等). 4 一般是正常代谢的拮抗物. 抗类似物突变株的优点 可遗传性地解除代谢调节作用(反馈抑制). 对不能从野生菌或营养缺陷型得到生产菌株时,可通过选育抗类似物突变株的方法育得氨基酸生产菌. 假如找到合适的类似物,分离抗类似物突变株,简单易得. 易于保存,不发生回复突变. 抗类似物突变株筛选方法 在含有类似物的培养基上,抗类似物突变株能够生长(敏感株不能生长),并且把相对应的氨基酸分泌于培养基中,促进周边敏感株生长,形成增殖圈.选取有明显增殖圈的突变株,进一步试验. 结构类似物作用机理 1 氨基酸结构类似物能象氨基酸一样与变构酶的变构部位结合,抑制变构酶的活性,但这种抑制是不可逆的,类似物并不能代替氨基酸合成氨基酸合成蛋白质,因此类似物的浓度不会降低. 2 当变构酶结构基因发生改变,使变构酶的变构部位不再和类似物相结合,也不能与相对应氨基酸相结合,但其活性中心维持不变, 该突变株可以在含有结构类似物的培养基上生长. 3 由于活性中心维持不变,它能大量积累代谢产物,而不受反馈抑制或阻遏. 抗结构类似物突变株举例 L-赖氨酸结构类似物: Lys: CH2(NH2)-CH2-CH2-CH2-CH(NH2)COOH AEC: CH(NH2)-CH2- S - CH2-CH(NH2)COOH IMP生物合成途径 肌苷酸的代谢调节途径 积累肌苷酸突变株选育 如果要积累肌苷酸需满足下列条件:1 切断IMP向AMP和GMP的代谢流.2 IMP之前的酶活性不能被抑制. 积累肌苷酸突变株选育 选育腺嘌呤缺陷型(Ade-)或腺嘌呤+鸟嘌呤缺陷型(Ade-+Gu-)或腺嘌呤+黄嘌呤缺缺陷型(Ade-+Xan-). 在培养基中限量添加腺嘌呤 鸟嘌呤等物质,以解除其对PRPP转胺酶的抑制. 积累肌苷酸突变株选育 Mn+对细胞膜的通透性有影响,需保持生长量的“亚适量”才能积累IMP. 生产中实际运用的菌株具有许多遗传标记(如:腺嘌呤缺陷+黄嘌呤缺陷型+组氨酸缺陷型+8-氮鸟嘌呤抗性+黄胺胍抗性等) * 苯丙氨酸代谢途径关系到三种遗传病 尿黑酸病 苯丙酮尿症 白化病