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梅花星猪类群种质分子特征的研究 　　摘要：利用PCR-RFLP等技术检测了湖北省黄梅县梅花星类群49头猪的ESR、FSHβ（影响产仔数）、 TEF1（生长速度）、LPIN1、H-FABP（肌内脂肪含量），MC4R、CMYA1（背膘厚度）等7个候选基因的多态性。结果表明，梅花星猪类群中上述7个候选基因均有丰富的多态性，特别是肌内脂肪含量有利基因的基因频率较高，是其肉质优良的分子基础。其他性状相关基因的杂合子频率也较高，通过和已有的研究对比，初步分析梅花星猪类群受外来猪杂化程度严重，本研究为梅花星猪遗传资源的保护和利用提供了科学依据。 　　关键词：梅花星猪；产仔数；生长速度；背膘厚度；肌内脂肪含量；候选基因 　　中图分类号：S828.8+9 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）16-3995-04 　　中国地大物博，有着丰富的自然气候和多样的地形地貌，各个地方的经济情况与市场差异大，对种猪产生了不同的需求，对外部形态和生产性能的人工选择标准不一，加上饲料与饲养管理条件上的差别，从而形成了与当地生态环境社会经济相适应的众多地方品种。 　　20世纪80年代的中国生猪品种调查发现，梅花星猪产于华北和华中地区之间的过渡地带，主产于湖北省黄梅县和阳新县一带，湖北的武穴市及蕲春县、安徽省的宿松县和江西省的瑞昌县、武宁县也有分布。其头型主要呈现“象鼻头”，有的猪在额、鼻、尾间、下腹及四肢下端有白毛，其中额部的一小撮是梅花状白毛，故被称之为“梅花星猪”。与中国地方品种一样，具有耐粗饲、抗逆性强、繁殖率高、肉质细嫩香醇等优点。1982年，专家赴产区考察，认为主产阳新的“阳新猪”和主产黄梅的“梅花星猪”属同一品种，并定名为阳新猪。梅花星猪实际上成为了阳新猪的一个类群。近些年来，由于外三元商品猪迅猛发展的冲击，位于黄梅县的梅花星猪保种场名存实亡，梅花星猪的生存受到重挫，濒临灭绝[1，2]。黄梅县五祖镇的黄梅强立畜牧有限公司历经2年多的努力，从黄梅、宿松、蕲春、柳林等各乡镇收集了100多头梅花星猪，从而形成了一定规模的梅花星猪保种群体。 　　本研究采集了梅花星猪类群中有明显品种特征的49头猪个体的耳组织样品， 对与产仔数（ESR、FSHβ）、生长速度（TEF1）、肌内脂肪含量（LPIN1、H-FABP）和背膘厚度（MC4R、CMYA1）相关的主要候选基因的多态性进行了检测和分析。从分子水平对梅花星猪进行了种质特性的评估，为该猪种的保护和开发利用提供科学依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 样本采集和基因组DNA提取 　　采集黄梅县五祖镇黄梅强立畜牧有限公司的梅花星猪类群中有明显品种特征的49头个体的耳组织。加入75%乙醇， -20 ℃保存备用。酚-氯仿法提取基因组DNA。 　　1.2 试剂与材料 　　TaqⅠ、HinfⅠ、BshNⅠ、PvuⅡ限制性内切酶，DL 2000 DNA Marker等购于生工生物工程（上海）股份有限公司。 　　1.3 引物设计 　　ESR、FSHβ、TEF1、LPIN1、H-FABP、MC4R、CMYA1基因的引物如表1所示。 　　1.4 PCR扩增 　　PCR反应总体积是10 μL，体系如下：50 ng的基因组DNA，1×PCR Buffer（含Mg2+，TaKaRa），引物终浓度为0.3 μmol/L，dNTPs终浓度为75 μmol/L，Taq DNA聚合酶 1 U。PCR扩增程序如下：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，50～65 ℃ 30 s（具体退火温度见表1），72 ℃ 10～90 s（具体延伸时间根据目的片段长度确定，详情见表1），34个循环；最后72 ℃继续延伸5 min。 　　1.5 多态性检测 　　FSHβ等位基因由片段插入造成， 琼脂糖电泳检测PCR 产物即可见多态性。其他6个基因均采用PCR-RFLP 方法进行分析。 　　2 结果与分析 　　2.1 ESR基因 　　由图1可知，ESR基因出现了3种基因型。121 bp纯合子（AA基因型）；121、 65、56 bp杂合子（AB基因型）；65、56 bp纯合子（BB基因型）。梅花星猪类群ESR基因多态性检测结果见表2所示。 　　2.2 FSH β基因 　　由图2可知，FSHβ基因有3种基因型，500 bp纯合子（AA基因型）；500、220 bp杂合子（AB基因型）；220 bp纯合子（BB基因型）。梅花星猪类群FSHβ基因多态性检测结果如表2所示。 　　2.3 TEF1基因 　　由图3可知，TEF1基因有3种基因型，分别为93 bp纯合子（GG基因型）、93、118 bp杂合子（AG基因型）、118 bp纯合子（AA基因型）。梅花星猪类群TEF1基因多态性检测结果如表2所示。