质粒DN的提取与鉴定.pptVIP

质粒DNA的提取、定量酶切鉴定 /sfzx/ 实验内容 实验目的 掌握碱裂解法提取质粒的方法 了解紫外吸收法检测DNA浓度与纯度的原理、方法 学习水平式琼脂糖凝胶电泳操作 第二部分 质粒DNA提取与定量 Extraction and Quantitation of Plasmid DNA 独立于细菌染色替外，能独立自主复制的闭合环状DNA分子； 存在于细菌，放线菌，真菌以及一些动植物细胞中，在细菌细胞中最多． 碱裂解法 煮沸裂解 羟基磷灰石柱层析法 质粒DNA释放法 酸酚法等 分离质粒DNA的方法包括3个基本步骤： 培养细菌使质粒扩增； 收集和裂解细菌； 分离质粒DNA 2、离心层析柱 溶液 P1 溶液 P2 溶液 P3 去蛋白液 PE 漂洗液 WB 洗脱液 EB 50mmol/L 葡萄糖 25mmol/L Tris·Cl(pH8.0) 10 mmol/L EDTA (pH8.0) 作用：分散细胞，鳌合金属离子使金属酶失活 注意：菌液一定悬浮均匀，不能有结块 0.2 mol/ L NaOH 1% SDS 作用：细胞壁肽聚糖在碱性下水解，核酸和蛋白质变性。 注意：时间勿太久，动作要温柔，轻轻颠倒几次 5mol/L 乙酸钾 60 ml 冰乙酸 11.5ml 水 28.5ml 作用：酸性条件下质粒DNA复性