硅羟基磁珠制备和全基因组DNA提取优化.PDF

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2017, 33 6 :223-229 硅羟基磁珠的制备及全基因组 DNA 提取优化 1 1 3 2，3 1 李海洋  王飞  雷红涛  张璇   陈珂 （1. 西南科技大学生命科学与工程学院，绵阳 621000 ；2. 广东顺德创新设计研究院，佛山 528000 ；3. 广东省食品质量安全重点实验室 农 业部农产品贮藏保鲜质量安全风险评价实验室 华南农业大学食品学院，广州 510642） 摘 要 ： 旨在制备硅羟基功能化纳米磁珠与核酸提取试剂，并对提取过程进行优化。采用溶剂热法制备硅羟基功能化纳米 磁珠，并用表面化学修饰法在磁珠表面包裹SiO2 ；在自制磁珠提取过程中分别对比缓冲液浓度、裂解液浓度、磁珠量以及洗脱温 度等因素对DNA 提取效率的影响，使用紫外分光光度计定量测定和琼脂糖凝胶电泳定性验证，并与商品化磁珠试剂盒提取效果进 行对比。结果显示，通过水热法成功合成了粒径在200 nm 左右的Fe O @SiO 磁珠，当磁珠量为1.5 mg，裂解液为含5 mol/L 的盐 3 4 2 酸胍溶液 （pH4.9），缓冲液体系为含60% 无水乙醇的60 mmol/L 盐酸胍缓冲液 （pH7.5），洗脱温度为65℃时，所提取的核酸效果 达到最优，且4 个因素对浓度的影响均存在统计学差异 （ 0.05）。利用自制磁珠和试剂体系可高效的完成全血中全基因组DNA P 的提取，且优于商业化试剂盒。 关键词 ： 纳米磁珠 ；表面修饰 ；全基因组DNA 提取 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2016-1045 Optimization of Genomic DNA Extraction with Silica Hydroxyl Magnetic Beads 1 1 3 2，3 1 LI Hai-yang WANG Fei LEI Hong-tao ZHANG Xuan CHEN Ke （1. School of Life Science and Engineering ，Southwest University of Science and Technology ，Mianyang 621000 ；2. Guangdong Shunde Innovative Design Institute ，Foshan 528000 ；3. Guangdong Provincial Key Laboratory of Food Quality and Safety ，Key Risk Assessment Laboratory of Agricultural Product Preservation ，Ministry of