素酶表达影响.PDFVIP

doi:10.6043/j.issn.0438-0479.201703020 转录调控因子BglR 缺失对东方肉座菌纤维 素酶表达的影响 刘富川，薛勇，刘健，甘礼惠，龙敏南* （厦门大学能源学院福建 厦门 361102 ） 摘要：东方肉座菌（Trichoderma orientalis ）EU7-22 是一株高效分泌纤维素酶的丝状真菌， 对生物质转化重要价值。本文采用 TAIL-PCR 方法克隆得到纤维素酶转录调控因子bglr 基 因及其上下游序列，并经同源交换获得bglr 基因敲除的菌株T. orientalis EU7-22Δbglr，其产 滤纸酶、外切酶、木聚糖酶活力和分泌蛋白最高值较对照菌株分别增加了39%、22%、16% ) 和20%，而β-葡萄糖苷酶活力下降47% ，其编码基因bgl1 表达量显著降低，同时发酵液pH 版 值也发生明显变化。研究结果表明BglR 的缺失抑制了菌株EU7-22 在以特定多糖/寡糖为碳 学 源的培养基上的生长，且BglR 在β-葡萄糖苷酶的调控过程中起正调控作用，为构建高效降 科 解纤维素的工程菌株提供依据。 然 关键词：东方肉座菌；bglr 基因；转录调控因子；β-葡萄糖苷酶 自 ( 中图分类号：Q 939.97 文献标志码：A 报 学 天然纤维素是自然界储能最多、最古老、最丰富的天然可再生生物质，是生物质能源的 学 主要原料。纤维素的多种加工利用过程依赖于微生物，尤其是丝状真菌，因为其在降解生物 大 [1] 质过程中形成了一种高效、复杂的机制用来分泌一组水解和氧化酶，并对降解起主要作用 。 门 然而，目前能高效分泌纤维素酶和半纤维素酶的丝状真菌，仅有少数如里氏木霉 厦 [2] （Trichoderma reesei）等被开发应用 。因此，对于具有工业化潜力的丝状真菌，研究其纤 维素酶基因的表达调控机理势在必行，以期更有效地构建和改造纤维素酶高产菌株。 转录调控因子在丝状真菌的纤维素酶表达调控过程中起关键作用。木聚糖基因调控因子 [3] xlnR 是第一个被鉴定的转录因子 ，也是纤维素利用过程中的重要调控因子，其多数同源序 列存在于丝状真菌中。在里氏木霉（T. reesei）中，Xyr1 可调控纤维素酶基因和半纤维素酶 [4] 基因的转录 。对黑曲霉（Aspergillus niger ）和粗糙脉孢菌（Neurospora crassa ）中的CREA/1 收稿日期：2018-03-07 收稿日期：2018-04-09 基金项目：福建省海洋高新产业发展专项项目（闽海洋高新[2015]27 号）；厦门大学能源发展基金 （2017NYFZ02 ） *通信作者：longmn@ [5] 进行敲除 ，可有效抑制碳源代谢阻遏，提高其纤维素酶和半纤维素酶基因在非诱导表达条 件下的表达。另一个纤维素酶基因表达调控因子ACE1 在里氏木霉（T. reesei）和康氏木霉 （Trichoderma koningii）中作为负调控因子进行调节，有研究表明，在槐糖和纤维素的诱