点青霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其酶学性质研究-生物技术通报.PDF

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2018-11-17 发布于天津
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点青霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其酶学性质研究-生物技术通报.PDF

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点青霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其酶学性质研究-生物技术通报

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2016, 32 7 :152-159 点青霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其酶学性质研究 1 2 1 2 1 1 1 高庆华胡美荣吴芳彤陶勇王云鹏罗同阳胡常英（1. 河北省微生物研究所，保定 071051 ；2. 中国科学院微生物研究所，北京 100101）摘要：旨在克隆点青霉菌（）中的葡萄糖氧化酶基因（GOD），在毕赤酵母（）中异源表 Penicillium notatum Phchia pastoris 达，纯化并研究其酶学性质。利用PCR 技术从点青霉 No.8312 菌株的基因组 DNA 中克隆得到 GOD 基因，将该基因克隆到穿梭载体pMD-AOX 上并在毕赤酵母X33 中表达，对纯化后的葡萄糖氧化酶的酶学性质进行分析。结果显示，X33-GOD 可高表达具有活性的GOD，在30℃、pH6.5 的条件下，其培养液上清GOD 酶活可达496 U/mL，比活123.0 U/mg ；重组表达的葡萄糖氧化酶最适 2+ 对其有激温度为40-45℃，最适pH 为6.0，酶的稳定性研究表明，该酶在pH3.5-7.0 区间和温度低于50℃下稳定。1 mmol/L Zn + 对该酶活性有较大抑制作用。构建出GOD 的高产毕赤酵母工程菌株，与点青霉GOD 相比，具有更高的发酵酶活和活作用；Ag 比活。关键词：葡萄糖氧化酶；点青霉菌；重组表达 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2016.07.023 Cloning of Gene for a Glucose Oxidase from Penicillium notatum and Its Enzymatic Properties 1 2 1 2 1 1 GAO Qing-hua HU Mei-rong WU Fang-tong TAO Yong WANG Yun-peng LUO Tong-yang HU Chang-ying1 （1. Institute of Microbiology ，Hebei Academy of Sciences ，Baoding 071051 ；2. Institute of Microbiology ，Chinese Academy of Sciences ， Beijing 100101 ） Abstract: