试验一特殊显微镜的使用-长江师范学院试验教学智能管理系统.PDF

细胞生物学实验指导 主编：陈 春 长江师范学院 生命科学与技术实验教学中心 2010年1月 细胞生物学实验指导 实验一、特殊显微镜技术 一、实验目的 掌握相差显微镜的原理；暗视野显微镜的操作方法 掌握荧光显微镜的结构原理及使用方法； 了解其他显微镜的使用方法。 二、实验材料 普通光学显微镜及其附件；落射式荧光显微镜及其附件；倒置显微镜； 玻片；棉花。 三、实验内容 显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和 电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后 者则以电子束为光源。 1、光学显微镜 （1）普通光学显微镜 普通生物显微镜由 3 部分构成，即：①照明系统，包括光源和聚光器； ②光学放大系统，由物镜和目镜组成，是显微镜的主体，为了消除球差和 色差，目镜和物镜都由复杂的透镜组构成；③机械装置，用于固定材料和 观察方便（图 2-1 ）。 显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨力 （resolution ）有关，分辨力是指显微镜（或人的眼睛距目标25cm 处）能分 辨物体最小间隔的能力，分辨力的大小决定于光的波长和镜口率以及介质 的折射率，用公式表示为： R=0.61λ /N ．A ． N ．A ．＝ｎsinα/2 1 细胞生物学实验指导 式中：n=介质折射率；α=镜口角（标本对物镜镜口的张角），N.A.=镜 口率（numeric aperture ）。镜口角总是要小于 180˚，所以 sina/2 的最大值必 然小于 1。 表 2-1 及中介质的折射率 介质 空气 水 香柏油 α溴萘 折射率 1 1.33 1.515 1.66 制作光学镜头所用的玻璃折射率为 1.65~1.78，所用介质的折射率越接 近玻璃的越好。对于干燥物镜来说，介质为空气，镜口率一般为 0.05~0.95 ； 油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近 1.5。 普通光线的波长为 400~700nm ，因此显微镜分辨力数值不会小于 0.2μm ，人眼的分辨力是 0.2mm，所以一般显微镜设计的最大放大倍数通常 为 1000X。 （2 、荧光显微镜 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些 物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线 照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具 之一。 2 细胞生物学实验指导 图2-3