PBI-SUR-TK载体靶向介导HSV-TK自杀基因诱导肝癌细胞凋亡.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１６，３６（２）：１６２１ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ ＰＢＩＳＵＲＴＫ载体靶向介导ＨＳＶＴＫ 自杀基因诱导肝癌细胞凋亡 １ １ １ １ １ １ １ １ 张英敏 　赵　娜 　李勇芳 　孟凡秀 　张　琪 　高然朋 　张悦红 　于保锋 １ １ １ ２ 　郭　睿 　王海龙 　解　军 　徐　钧 （１山西医科大学基础医学院　太原　０３０００１　２山西医科大学附属山西省肿瘤医院　太原　０３００１３） 摘要　目的：构建Ｓｕｒｖｉｖｉｎ启动子调控的表达载体，并检测在启动子调控下ＨＳＶＴＫ自杀基因对 肝癌细胞ＨｅｐＧ和正常肝细胞ＨＬ７７０２凋亡的影响。方法：合成含ＴＫ基因的质粒ＰＢＩＳＵＲＴＫ， ２ 利用脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００将其导入肝癌细胞和肝细胞。然后分别运用ＲＴＰＣＲ和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ特异性检测基因和蛋白的表达情况；利用ＣＣＫ８方法检测细胞增殖情况，流式细胞仪上机检 测细胞凋亡情况。结果：肝癌细胞转染组有更多的ＴＫ基因表达产物，增殖情况减弱，凋亡情况明 显。结论：Ｓｕｒｖｉｖｉｎ启动子驱动的ＨＳＶＴＫ／ＧＣＶ自杀基因系统对肝癌可能有一定的治疗作用。 关键词　Ｓｕｒｖｉｖｉｎ启动子　肝癌　ＨＳＶＴＫ／ＧＣＶ　凋亡 中图分类号　Ｑ７８９ 　　肝癌是一种我国常见的恶性肿瘤，发生率和死亡 胸苷激酶 ＴＫ磷酸化成毒性物质 ＧＣＶＴＰ，它是 ｄＧＴＰ 率均位于前列。它的治疗手段分为手术治疗，化学药 ［６７］ ［８］ 的抑制剂 ，从而阻断ＤＮＡ合成，诱导细胞凋亡 。 ［１］ 物治疗，放射治疗和生物治疗等 。因其他治疗方法 １　材料与方法 存在着或多或少的缺陷，生物治疗近年来日益成为研 ［２］ 究的热点 。基因治疗因其独特的靶向性在生物治疗 １．１　材　料 中发挥着重要作用。自杀基因治疗作为其中一个研究 １．１．１　细胞、质粒及菌株　肝癌细胞系ＨｅｐＧ 购自中 ２ 相对成熟的方向，仍被广泛应用。常用的如单纯疱疹 国科学院上海生物化学研究所；正常肝细胞 ＨＬ７７０２ ［３］ 病毒胸苷激酶基因／丙氧鸟苷系统 。 由山西医科大学生化实验室保存；ＰＢＩＳＵＲＴＫ质粒由 　　肿瘤分子标记物作为特异性物质存在于各种类型 中国质粒载体菌株细胞基因保藏中心构建合成；大肠 的肿瘤中。Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因存在于多种肿瘤组织细胞中， 杆菌ＤＨ５ 购自北京全式金生物有限公司。 α ［４］ 比如乳腺癌、宫颈癌、肝癌、肺癌等 ，在正常组织中鲜 １．１．２　试　剂　ＤＭＥＭ培养基，ＩＭＤＭ培养基和Ｏｐｔｉ 有表达。它的基因表达产物凋亡抑制蛋白，能够抑制