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（2）方法评价 ①赖氏法的实验结果需与卡门分光法的结果对比后求出； ②NaOH的浓度对显色有影响； ③该法的重复性差。 * 卡门氏单位：1.0ml血清在25℃，340nm，反应体积3.0ml,光径1.0cm时每分钟测定吸光度下降0.001，即消耗4.82 ? 10-4μmol NADH为一个卡门氏单位 * 【参考范围】 5～25卡门氏单位 【临床意义】 (2) 慢性活动性肝炎或脂肪肝： (1) 肝细胞损伤的灵敏指标: ALT轻度增高(100～200IU),或属正常范围. * ALT测定连续监测法（速率法） 原理：L-丙氨酸+α-酮戊二酸 L-谷氨酸+丙酮酸 丙酮酸+NAD+ LDH 乳酸+NADH ALT * （２） 方法评价： ①存在着两个副反应，会使测定结果偏高； A、血清中存在的α-酮酸(如丙酮酸)能消耗NADH。 B、血清中谷氨酸脱氢酶(GLDH)增高时，在有氨存在条件下，亦能消耗NADH。 ②双试剂法，因温育期长，能有效地消除干扰反应，测定准确性高，是ALT测定的首选方法； ③血清不宜反复冰冻保存，以免影响酶活性；避免使用溶血标本。 * 3.赖氏法测定AST （１）原理与方法评价（类似ALT测定）　 【参考范围】 8～28卡门氏单位 【临床意义】 增高见于： 心肌梗死、肌炎、胸膜炎、肾炎及肺炎和各种肝病病人 * 4．连续监测法测定AST （１）原理：　 L-门冬氨酸+α-酮戊二酸 草酰乙酸+L- 谷氨酸 草酰乙酸+NADH L-苹果酸+NAD+ 　 　双试剂法 :同ALT测定 MDH AST * （２）方法评价 误差来源 内源性干扰:主要来自血清中高浓度丙酮酸和L-谷氨酸脱氢酶(GLDH)。 外源性:干扰来自试剂中污染的GLDH和AST。 【参考范围】 5～40 IU/L(连续监测法测定)　　 【临床意义】 见赖氏法 * (二)ALP测定 化学法 连续监测法： 鲍氏法 金氏法 皮氏法 * １、金氏法测定ALP （１）原理： 　　磷酸苯二钠 酚+磷酸 酚+4－AA-P 红色醌 　 ALP OH- K3Fe(CN)6 * (2) 方法评价： 　　　磷酸苯二钠比色法与更早的β-甘油磷酸钠法相比具有较大的优点，如水解速度快，保温时间较短、灵敏度较高、显色稳定、不需去蛋白、操作简单、快速。 　　　但与磷酸对硝基酚连续监测法相比，准确度、精密度较低；操作比较繁琐,，灵敏度低。 * 【参考范围成人：3～13 单位,儿童：5～28单位 　　ALP金氏单位定义是100ml血清，37℃与底物保温15分钟，产生1mg酚为1个金氏单位。 ALP主要用于诊断肝胆和骨骼疾病 【临床意义】 * 2.连续监测法测定ALP （１）原理： 　　4-NPP+AMP 对硝基酚(黄色） （１）方法评价： 线性范围可达500U/L，批内CV为2.06%～2.36%，批 间CV为2.74%。 ALP OH - * 【参考范围】 　男性：1～12岁 500U/L, 女性：1～12岁 500U/L 　　　　12～15岁 750U/L， 15岁 40 ～150U/L，25岁 40～150U/L。 【临床意义】 见金氏法 * (三)GGT测定法 化学法（重氮反应比色法）和连续监测法。 1. 重氮反应比色法测定GGT 原理： 【参考范围】 男性 3 ～17 U/L； 女性 2 ～13 U/L 　(2) 方法评价： 重氮比色法活性单位：100ml血清在37℃下反应1hr, 生成0.5μmol的α-苯胺为1个GGT活性单位。 * (1) 原理： 　 (2) 方法评价： 【参考范围】 男性：11～50 U/L；(以γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺为底物) 女性：7～32 U/L 男性： ≤40U/L；女性：≤30U/L(以γ-谷氨酰-4-硝基苯胺为底物) * (四)MAO测定 原理 　　MAO主要作用于CH2-NH2基团，在氧参与下，氧化脱氨生成相应的卞醛、氨及过氧化氢。以苄氨偶氮-β-萘酚为底物,在O2和H20参与下，MAO催化生成苄醛偶氮-β-萘酚、氨及过氧化氢，用环己烷抽提后进行比色测定。 * (2) 方法评价 【单位定义】： 　　 1ml血清与底物在37℃孵育60分钟，催化单胺氧化产生1nmol苄醛偶氮-β-萘酚为1 个MAO单位。 【参考范围】 12～40 U/ml 【临床意义】：肝硬化时，肝