益元宁肝胶囊质量标准的研究.docVIP

益元宁肝胶囊质量标准的研究 　　【摘 要】 目的：建立益元宁肝胶囊的质量控制方法。方法：采用TLC法鉴别方中的山茱萸和丹参，采用HPLC法测定马钱苷的含量。结果：在TLC色谱中可检出山茱萸、丹参的特征斑点；马钱苷在0.1462～0.7310μg （r=0.9995），平均回收率为99.87%（RSD 1.10%，n=6）。结论：所建立的方法能够准确可靠地进行定性、定量检测，重复性好，适用于益元宁肝胶囊的质量控制。 　　【关键词】 益元宁肝胶囊；马钱苷；山茱萸；高效液相色谱法 　　益元宁肝胶囊为濮阳市某医院协定处方，由菟丝子、山茱萸、黄芪、灵芝、丹参、肉苁蓉、贯众等药组成，具有解毒护肝、益气健脾、调节免疫的功效，用于急慢性肝炎、肝炎病毒携带者。本品临床疗效肯定，但原质量标准较简单，不能准确地把握产品内在质量。本实验采用薄层色谱法（TLC）对方中的山茱萸和丹参进行了薄层鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）测定山茱萸中的马钱苷的含量[1]，建立了简便可行、准确可靠的质量控制标准和检验方法。 　　1 仪器与试药 　　Agilent 1260高效液相色谱仪，配有四元梯度泵和Agilent chenstation数据工作站；artorius CPA 225D分析天平，编号熊果酸对照品（批号110742-2000517），丹参酮ⅡA对照品（批号：110766-200518），马钱苷（批号：110640-201005），均购自中国药品生物制品检定所。益元宁肝胶囊（规格0.35g?粒-1，批号：121022，121115，130103）及阴性对照品自制均由濮阳市某医疗机构提供；乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 薄层鉴别 　　2.1.1 山茱萸的薄层鉴别 取本品内容物5g，倾取内容物，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流2h，提取液回收乙醚至干，残渣加无水乙醇-氯仿（3∶2）混合液1ml微热使溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每毫升含0.5mg的对照品溶液。按照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-氯仿-乙酸乙酯（20∶5∶8）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。阴性对照无相应斑点（见图1）。 　　2.1.2 丹参的薄层鉴别 取本品内容物5g，倾取内容物，加氯仿50ml，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参酮ⅡA对照品，加乙醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；阴性对照无相应斑点（见图2）。 　　图1 山茱萸薄层鉴别 图2 丹参薄层鉴别 　　2.2 马钱苷的含量测定[2] 　　2.2.1 色谱条件 色谱柱： Venusil MP C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈一―水（12∶88）为流动相；流速为1.0ml/min。柱温30℃，检测波长为238，理论塔板数大于 3000。在此条件下，马钱苷与相邻组分均能达到完全分离（见图3）。 　　2.2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取马钱苷对照品14.62mg，加80%甲醇制成浓度为0.1462mg/ml的溶液，作为对照品储备溶液，备用。取上述对照品储备溶液2ml至10ml量瓶中，加80%甲醇至刻度。即得每毫升含马钱苷0.02924mg的对照品溶液[3]。 　　2.2.3 供试品溶液的制备 取本品内容物研细，取约0.5g，精密称定，置烧瓶中，精密加入80%甲醇25ml，称定重量，加热回流1h，放冷，用80%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。阴性对照品溶液的制备：另取不含山茱萸药材的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。 　　2.2.4 测定方法 分别吸取对照品溶液、样品溶液和阴性对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，以外标法分别计算马钱苷的含量。 　　2.2.5 阴性对照品的测定 取不含山茱萸药材的阴性样品，按“2.2.3”项下方法操作，得阴性对照溶液。依法测定，结果表明阴性液无干扰（见图3）。 　　2.2.6 方法学考察 　　2.2.6.1 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液各5、10、15、20、25μl，按上述色谱条件进行测定，以进样量为横坐标、色谱峰面积为纵坐标分别作