益气化瘀方对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠保护的作用机制的研究.docVIP

益气化瘀方对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠保护的作用机制的研究 　　【摘要】目的：探讨益气化瘀方对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用。方法：观察不同剂量益气化瘀方对冠状动脉结扎法复制的大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的保护作用。结果：益气化瘀方高、中剂量组梗塞区心肌面积及重量均显著降低，与缺血再灌注模型组比较均有显著性差异(P0.01)。益气化瘀方低剂量组梗塞区心肌面积及重量均降低，与缺血再灌注模型组比较有统计学意义(P0.05)；益气化瘀方高剂量组MMP9及TNF-α含量明显降低，SOD活性明显增加，与缺血再灌注模型组比较均有显著性差异(P0.01)。益气化瘀方中剂量组MMP9及TNF-α含量降低，与缺血再灌注模型组比较均有统计学意义(P0.05)；SOD活性明显增加，与缺血再灌注模型组比较有显著性差异(P0.01)。益气化瘀方低剂量组SOD活性增加，与缺血再灌注模型组比较有统计学意义(P0.05)。结论：益气化瘀方对大鼠心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用，为其临床应用提供了进一步的实验室依据。 　　【关键词】益气化瘀方；心肌缺血再灌注损伤；超氧化物歧化酶；肿瘤坏死因子-α；基质金属蛋白酶- 9 　　本文旨在探讨益气化瘀方对大鼠缺血再灌注模型中的超氧化物歧化酶（SOD），基质金属蛋白酶（MMP9），肿瘤坏死因子（TNF-α）以及该方对缺血再灌注所致心肌梗塞程度等指标的影响，初步观察了益气化瘀方对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用并对其作用机制进行了初探，为该方在保护急性心肌缺血再灌注损伤的临床应用提供了实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1动物SD大鼠40只，雄性，180～220 g，购自南方医院动物中心，合格证号：SCXK(粤) 2004-2005。 　　1.1.2药物益气化瘀方由田七10g，丹参20g，土鳖虫10g，仙鹤草15g，五爪龙15g组成；上方煎煮两次，药液浓缩成每毫升相当于0.6g生药的浓度，供灌胃用。 　　1.1.3材料SOD试剂盒购自南京建成生物工程研究所，MMP9试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司，TNF-α试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司。动物呼吸机( ALC-V8，上海奥尔科特生物科技有限公司)；单导心电图机（ECG-6511型，上海汇丰医疗器械有限公司）。 　　1.2方法 　　1.2.1动物分组与处理40只SD大鼠随机分为5组，每组8只：假手术组，缺血再灌注模型组（用等同容积生理盐水灌胃），实验组（益气化瘀方高、中、低剂量组），根据人鼠临床用药换算公式，换算成鼠的用量，分别给予益气化瘀方高、中、低剂量（高剂量、中剂量、低剂量15.9、7.94、3.97g／kg?d)药物灌胃，每日一次，共10d，末次灌胃后12h，造模并检测相关指标。 　　1.2.2心肌缺血再灌注模型的制备实验动物用1%戊巴比妥钠腹腔麻醉，仰位固定，常规记录肢体Ⅱ导联。沿胸骨左缘心脏搏动处纵向剪开皮肤约2cm，暴露左第2-4肋，开胸打开心包膜，充分暴露心脏及其表面的血管，用4/0医用缝合线在冠状动脉前降支挂线，结扎40min后，观察心电图变化。假手术组只穿线不结扎。剪断结扎线，开始心肌再灌注，观察60min[1]。 　　1.2.3取材及测定再灌注结束时于右心房取血3ml，分离血清，放射免疫法测定TNF-α；再灌注结束时于腹主动脉令取血2ml，酶联免疫法测定MMP-9；再灌注结束时，在结扎线下约3cm处取0. 2g左右心肌组织，按比例(10%)加入冰盐水，在冰水混合浴中进行组织匀浆，低温离心2500r/min，15min，取上按试剂盒说明检测SOD。心脏结扎线以下横切5片，N-BT染色,采用多媒体彩色病理图文分析系统(MPIAS-500)测量正常心肌及梗塞心肌面积，观察心肌梗塞程度。 　　1.2.4统计学方法计量资料数据用均数±标准差（±s)表示，采用SPSS 13.0统计软件对各组数据进行单因素方差分析，组间比较用t检验，P0.05为有统计学意义。 　　2结果 　　2.1对心肌梗塞程度的影响：结果见表1。益气化瘀方高、中剂量组梗塞区心肌面积及重量均显著降低，与缺血再灌注模型组比较均有显著性差异(P0.01)。益气化瘀方低剂量组梗塞区心肌面积及重量均降低，与缺血再灌注模型组比较有统计学意义(P0.05)。 　　 　　与假手术组比较，**P＜0.01，与缺血再灌注模型组比较，# P＜0.05，## P＜0.01 　　2.2对血清SOD、MMP9及TNF-α含量的影响结果见表2。缺血再灌注模型组SOD含量明显减少、MMP9及TNF-α含量明显增加，与假手术组比较有显著性差异(P0.01)。益气化瘀方高剂量组MMP9及TNF-α含量明显降低，SOD活性明显增加，与缺血再灌注模型组比较均