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纤溶酶及其临床的应用 　　 　　用蛇毒治疗血栓栓塞性心脑血管疾病，国内国外对其有了较深入的研究，蛇毒作为一种潜在的强有力抗栓抗凝药物，已成为蛋白酶领域的一个研究热点。 　　蛇毒成分复杂含有多种毒性成分，如神经毒、出血毒、凝血毒、抗凝血毒等。用蛇毒治疗血栓性疾病，主要是利用它的凝血毒和抗凝血毒。如果出血毒和神经毒出现在制剂中，可能引起临床副作用。目前粗蛇毒制剂在临床上应用较为广泛，但根据现代药物发展的要求，复合成分不是发展方向[1]。在蝰亚科、蝮亚科和眼镜科等蛇毒中存在着一类抗凝血毒，这种蛇毒能直接溶解纤维蛋白原或纤维蛋白的酶类，称之为纤维蛋白溶解酶（简称纤溶酶）[2],可直接作用于纤维蛋白凝块而起到溶栓抗凝的疗效。Ｏｕｙａｎｇ于1976年首次从尖吻蝮蛇毒中分离纯化得到纤溶酶，这些纤溶酶可用于溶解在心肌梗塞、中风、血栓等期间形成的血凝块，具有很高的药用价值[3、4]。 　　北京赛生药业有限公司采用单克隆抗体纯化技术，从蝮蛇蛇毒中提取纤溶酶并制成制剂――赛百 注射用纤溶酶。其原理是利用抗体最重要的生物学特性：抗体与抗原能够特异性结合。纤溶酶单克隆抗体纯化技术是用纤溶酶抗体与纤溶酶进行特异结合，而达到纯化纤溶酶同时去除其它出血毒和神经毒目的。由于对蛇毒纯化技术进行了重大革新，使得提取的纤溶酶制剂成分单一、纯度高达99.9%（赛生药业为中国药典纤溶酶质量标准起草单位）。应用单克隆抗体纯化技术制备的纤溶酶，不含有出血毒、神经毒等其它有毒成分，因此临床使用更加安全（见图）。使用此技术，完全符合现代药物的发展要求，为蛇毒纤溶酶广泛安全地应用于临床提供了质量保证。 　　 　　蛇毒中影响凝血-纤溶系统的蛋白酶类主要有两种：凝血酶样组分（thrombin-like enzyme,TLE）和纤溶酶样组分（fibrinolyticenzyme, FLE）。蛇毒的凝血酶样组分（TL E）只作用于纤维蛋白原，而对纤维蛋白不起作用。它对 [（Aα-Bβ-γ）2] 纤肽的A 肽精-甘链有特异性水解作用，不激活凝血因子ⅫⅠ只形成[（α-Bβ-γ）2]微纤，形成端对端的交联纤维蛋白，这种单体在动物体内很容易被纤溶成FDP碎片通过吞噬作用清除，不形成血栓。由于体内通过吞噬细胞作用有去纤维作用，产生抗凝效应，但在体外具有凝血酶样作用产生促凝反应，因此又称为类凝血酶，如降纤酶和巴曲酶。 　　纤溶酶样组分（fibrinolytic enzyme, FLE），是一种既能溶解纤维蛋白原（FG）又能溶解纤维蛋白（FP）的纤维蛋白溶解酶（简称为纤溶酶），能选择地作用于蛋白质A链和B链，连续分解为多种可溶性分子量大小不同的X/、Y/、D/、E/蛋白产物，这些FDP碎片又有纤溶激活作用。赛百 注射用纤溶酶就属于这类药物。这两种酶都可以溶解纤维蛋白原，但机理不同（见表1）。 　　 　　蛇毒纤溶酶属于单链锌金属蛋白酶，与血纤溶酶不同（表2），蛇毒纤溶酶不存在无活性的酶原形式，而是有活性的蛋白水解酶，不需要激活剂激活，分子量在22000至25000。蛇毒纤溶酶可直接溶解纤维蛋白原和纤维蛋白，但其溶解活力不同。实验发现其溶解纤维蛋白的速度是溶解纤维蛋白原的5倍，因此可直接作用于形成血栓的纤维蛋白，将血栓快速溶解，改善患者的临床症状；通过溶解血浆纤维蛋白原，降低血液粘度，抑制血栓的形成，防止再次梗塞。纤溶酶的直接纤溶作用较链激酶、尿激酶和rt-PA为强，纤溶效应与其用量呈正相关，用药后鱼精蛋白副凝试验（三P试验）呈强阳性，但不是DIC的凝血，优球蛋白溶解时间缩短。研究表明，纤溶酶专一地裂解纤维蛋白链的lys113-leu114键。蛇毒纤溶酶除降解纤维蛋白原和纤维蛋白外，不水解其它凝血因子及血小板膜。说明蛇毒纤溶酶的底物特异性比血纤溶酶更专一，这一特性使蛇毒纤溶酶具有较好的安全性。另外与血纤溶酶不同的是，蛇毒纤溶酶的热稳定性较高。从蝮蛇蛇毒中纯化的纤溶酶，在pH4～11范围内95℃加热20分钟，对其活性没有很大影响。这种对底物的专一性和对热的稳定性决定了蛇毒纤溶酶是一种强力溶栓剂及抗凝降粘药物[2、5-7]。 　　实验还发现蛇毒纤溶酶有弱纤溶酶原激活物活性（类似t-PA的作用），促进纤溶酶原活化成有活性的纤溶酶，从而加大溶解血栓的作用[8]。对蛇毒纤溶酶蛋白质氨基酸序列进行分析，发现蛇毒纤溶酶与神经生长因子的N-末端序列高度同源，同源性达到80-90%，因此蛇毒纤溶酶具有神经生长因子样作用，对受损的神经细胞有营养修复作用[9]。 　　纤溶酶既能直接作用于血栓中的纤维蛋白，又能适度溶解纤维蛋白原，因此临床使用纤溶酶具有溶解血栓和降粘抗凝双重作用。下面介绍纤溶酶在临床上应用情况： 　　临床观察一、观察纤溶酶静脉溶栓治疗急性脑梗死的临床疗效和安全性。60例急性脑梗死患者随机