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细菌耐药机制huishi)
细菌耐药机制研究进展 浙江大学医学院附属第一医院 俞云松 一、外膜孔蛋白减少或丢失 细胞内抗生素浓度降低 膜孔蛋白(OprD): 产气肠杆菌从亚胺培能敏感株变为耐药株 PCR扩增Omp36全长及序列分析 插入序列引起OprD2缺失(铜绿) ESBLs的分类 根据基因同源性不同分为: TEM型 80 SHV型 46 CTX-M型 37 OXA型 18 其它型 20 32家医院 1994-2003年大肠杆菌及肺炎克雷伯菌产ESBLs百分率 头孢菌素酶 大部分肠杆菌科细菌如肠杆菌属菌种、弗劳地枸橼酸杆菌、摩根摩根菌、普鲁菲登菌属菌种粘质沙雷菌等都能产生染色体介导的AmpC酶。 天然来源碳青霉烯酶 嗜麦芽寡养单胞菌的L1酶 获得性碳青霉烯酶(Ambler分子分类) B类酶(金属酶):IMP、VIM类及SPM-1 A类酶:NMC-A、KPC-1、GES-2等 D类酶:OXA-23至OXA-27、40、48、54 金属酶 染色体编码的金属酶:BC Ⅱ,L1,TUS-1,MUS-1,Sfh-1,Mbl1b,大多来源于环境寄生菌。 获得性金属酶:IMP VIM SPM GIM-1 SIM-1,位于可转移的基因元件上,造成区域性传播。 IMP型金属酶 IMP型金属酶GenBank上已公布21种,比较它们相互之间的序列表明:IMP型金属酶大致可以分为两组: 1)IMP-1、IMP3-7、IMP9-11、IMP-16 2)IMP-2和IMP-8、12、13、19、20 中国 IMP-4 2001年香港 鲍曼 2001年广州 杨格枸橼酸杆菌 、铜绿 IMP-1 2004年12月 江苏无锡 铜绿 IMP-8 2001 台湾 铜绿 VIM型金属酶 VIM型金属酶 与IMP类金属酶同源性?40%,但两类金属酶的动力学性质相似,编码基因都位于整合子上。 目前VIM型金属酶GenBank上已公布12种,比较它们相互之间的序列可将VIM金属酶大致分为三组: 1)VIM-1、4、5、11a 2)VIM-2、3、6、8、9、10、11b 3)VIM-7 VIM型金属酶分布 VIM-1 1999年 意大利 铜绿 氧化木糖产碱杆菌 恶臭假单胞 2003-2004希腊 大肠 肺克 法国 肺克 VIM-2 2000 法国 铜绿 意大利 希腊 日本 韩国 葡萄牙 西班牙 波兰 克罗地亚 智利 阿根廷 美国 中国 VIM-3 2001年 台湾地区 铜绿 VIM-4 2002年 希腊 铜绿 2003 瑞典 铜绿 2004 意大利 肺克 阴沟 2004 波兰 铜绿 VIM型金属酶分布 VIM-5 2004 土耳其 肺克 铜绿 VIM-6 2004 新加坡 恶臭假单胞 VIM-7 2004 美国 铜绿 VIM-8 哥伦比亚 铜绿 VIM-9,10 英国 VIM-11 阿根廷 意大利 VIM-2基因整合子结构图 A: B2, B3, B28, H19, H26, H54, G4 结构同In72 B: S5, S9, S10, S11, S12 (S15、H22除外) H22H26 g4 s5 s9 s10 s11 s12 s15 b2 b3 b28 w19w54Marker Schematic representation of the cloned E.coRⅠfragment 转化试验 抽提亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌质粒 转化DH5α,在含1?g/ml的亚胺培南的MH平板上筛选 成功筛选到亚胺培南耐药的转化菌(转化质粒约60kb) PCR PCR筛选β内酰胺酶耐药基因包括TEM-1、SHV、CTX-M-1、CTX-M-9、OXA-48、VIM 、 OXA-10和KPC-1 以肺炎克雷伯菌质粒DNA为模板PCR阳性为TEM、SHV和KPC 转化菌和克隆菌只有KPC阳性 PCR产物测序分别为TEM-1、SHV-12和KPC-2 转化菌质粒(亚胺培南耐药基因克隆) 克隆片段测序 对重组质粒的插入片段进行步移测序,获得1554bp核苷酸 DNAssist软件分析,1个开放读码框(ORF) 经GenBank Blast程序分析,该ORF与KPC-2 (?GenBank注册号:AY210886) 的核苷酸序列同源性为100% blaOXA-23-like,blaOXA-51-like是我国鲍曼不动杆菌最主要的碳青霉烯酶,ISAba1与OXA基因的表达和转移密切相关 氨基糖苷类钝化酶分为: 磷酸转移酶(APH) 乙酰转移酶(AAC) 核苷转
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