细菌的生化验2015.ppt

过氧化氢酶试验 【试剂与器材】 1、菌种 金黄色葡萄球菌 2、试剂 3%过氧化氢 3、器材 载玻片、无菌移液器吸头、酒精灯、火柴、超净工作台 过氧化氢酶试验 【操作步骤】 1、在载玻片中央滴加一滴3%过氧化氢。 2、用无菌移液器吸头蘸取少量细菌，在3%过氧化氢中混匀。 【结果】 观察气泡的产生情况。可以看见在吸头上金黄色葡萄球菌菌苔周围，产生大量气泡，为过氧化氢酶阳性。如果菌苔周围无气泡产生，为过氧化氢酶阴性。 过氧化氢酶试验 【注意事项】 1、普通金属接种环可能与过氧化氢反应，形成气泡，造成假阳性，因此必须使用铂丝接种环或塑料、玻璃材质的工具。 2、从血液琼脂平板上挑取菌落时千万小心，不要碰到培养基，因红细胞中有过氧化氢酶，即使一点点也会造成假阳性。 3、过氧化氢试剂现配现用。 第五 复合生化试验 一．KIA试验： 成分：KIA主要用糖是葡萄糖与乳糖，比例为1：10，指示剂为酚红。内还含有蛋白质4种衍生物：牛肉浸膏、酵母浸膏、蛋白胨和胨，硫代硫酸钠，铁盐等，无抑制物。 KIA 连续培养数小时后，在细菌和氧的作用下，培养基斜面部分所含氨基酸发生降解，释放胺类，产即中和斜面部分酸，经18～24小时后，整个斜面转变为碱性，又复原以红色。 原理：如某菌只分解葡萄糖，不能分解乳糖，它分解葡萄糖产少量酸，在最初培育的8～12小时内，这少量的酸也足以使深层和斜面酚红指示剂变黄。 如某菌既分解葡萄糖，又分解乳糖，那在KIA上产生大量酸（因乳糖含量多），超过斜面上形成的碱，成长整管培养基呈黄色。 培养基深层的氨基酸降解作用不足以中和细菌分解葡萄糖所产生的少量酸，故深层仍呈黄色。 培养基中的硫代硫酸钠可供给细菌产生H2S所需要的硫，铁盐-硫酸亚铁和枸橼酸铵铁分别与H2S起反应，产生不溶性的黑色FeS沉淀。由于细菌产生H2S需要在酸性环境中，所以KIA只限于琼脂深层变黑。 结果：碱性（K），酸性（A） 　　K/K：不发酵碳水化合物，为不发酵菌特征。 　　K/A：葡萄糖发酵，乳糖不发酵，如志贺菌。 　　K/A（黑色）：葡萄糖发酵，乳糖不发酵并产生硫化氢，如沙门菌。 　　A/A：葡萄糖和乳糖发酵，如大肠埃希菌和克雷伯菌属。 二．动力靛基质尿素试验（MIU） 成分：MIU主要含尿素的半固体培养基，指示剂为酚红，内还有蛋白胨，蛋白胨中含有色氨酸。 MIU 原理：当细菌在内生长，通过半固体培养基可观察其动力，另如果细菌能产生色氨酸酶，它可水解色氨酸形成靛基质，当加入对-二甲氨基苯甲醛（靛基质试剂）时可形成玫瑰色吲哚，玫瑰色吲哚为红色。如该菌又能产生尿素酶利用培养基中的尿素产碱，加酚红指示剂后显桃红色。因此MIU可以观察细菌动力、靛基质的产生和细菌分解尿素的活性。 有动力 无动力 A管：MIU＋－－ B管：MIU＋＋＋ 明胶水解实验 某些细菌能分泌明胶酶分解明胶，产生小分子物质。如果细菌具有分解明胶的能力，则平板培养基中的明胶被分解成小分子的物质，在平板上加上蛋白凝固剂后，明胶被分解部分的培养基呈现透明的状态，可以使菌落周围出现透明圈。 淀粉水解实验 有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色 ,在平板上加上碘液后，有淀粉的部分培养基遇淀粉变为兰色, 淀粉被分解部分的培养基呈现透明的状态，可以使菌落周围出现透明圈。 硫化氢产生实验 某些细菌能分解含硫氨基酸产生硫化氢，硫化氢遇重金属盐如铅盐、铁盐时则生成黑色硫化铅或硫化铁沉淀，从而可确定硫化氢的产生。在培养基中加入柠檬酸铁铵,培养后观察是否有黑色沉淀产生。培养基中加入硫代硫酸钠是为了保持低的氧化还原电位,防止产生的硫化氢被空气中的氧氧化,采用固体穿刺接种也是为了更好的保持低的氧化还原电位. 第三节 细菌的生化鉴定技术 细菌的基本鉴定技术 生化反应鉴定：通过观察细菌利用酶和降解糖类、醇类、脂类、蛋白质和氨基酸的能力可以了解其生化活性，从而识别和鉴定细菌。 免疫学鉴定（血清学鉴定） 编码鉴定 第一 碳水化合物代谢试验 一、糖（醇、苷）类发酵试验： 原理：各种细菌含有发酵不同糖类的酶，分糖类的能力各不相同，且不同细菌分解同一种糖的代谢产物也不一定相同。 糖发酵试验结果判断 反应现象 结果描述 酸性变色、有气泡 分解××糖产酸、产气 酸性变色、无气泡 分解××糖产酸、不产气 培养基不变色 不分解××糖 1．原理：细菌在分解葡萄糖的代谢过程中根据对氧