天花粉蛋白抑制HeLa细胞增殖的实验研究..docVIP

天花粉蛋白抑制HeLa细胞增殖的实验研宄 ：黄益玲，黄利鸣，惠燕，鲁华 关键词】天花粉蛋白；，，HeLa细胞；，，细胞凋亡 目的研究天花粉蛋白（TCS）对人宫颈癌HeLa细胞 生长的抑制作用，探讨TCS抗肿瘤的作用机制。方法采用MTT 法检测TCS对Hela细胞的抑制作用，形态学观察、DNA电泳 及流式细胞仪检测TCS对HeLa细胞的诱导凋亡作用。结果 TCS对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用，显微镜下可见 细胞圆缩，胞浆凝聚等凋亡细胞的形态学改变，DNA凝胶电 泳呈梯级格局，流式检测出现凋亡峰，凋亡比例具有剂量和 时间依赖性。结论天花粉蛋白通过诱导细胞发生凋亡而抑制 宫颈癌HeLa细胞的增殖。 关键词：天花粉蛋白；HeLa细胞；细胞凋亡 Experi mentalStudyofTrich osanthin1sEffecton ctiveTostudytheinh chosanthin(Tcs)on i-tumorTheantiprolCSonHelacellswasme ctiveTostudytheinh chosanthin(Tcs)on i-tumorTheantiprol CSonHelacellswasme .Lightmicroscopywa orphologychanges,D ores i sandFCManalys Abstract : Obje ibitoryeffectoftri Helacellsanditsant iferativeeffectofT asuredwithMTTassay susedtoobservethem NAagaroseelectroph iswerecarriedoutto examinetheinducedp roliferationofHeLa cellswassignifican tlyinhibitedbyTCS, Helacellsshowedase rialofcharacterist icchangesofapoptos issuchascell volum eshrinkage,chromat in condensation；th eoccurrenceofDNAla dder andapoptosis rateof Helacellswa sdoseandtimedepend ent.ConclusionTric hosanthincaninhibi ttheproliferationo fHelacellsbyitsinductionofapoptosis. Keywords : Trichosan thin； Helacell； Pr oliferation 宫颈癌是导致妇女死亡的第二大原因，严重威胁女性身 体健康。天花粉蛋白是从葫芦科植物栝楼的块根中提取出来 的一种单链核糖体失活蛋白(ribosome-inacti vatingprotEin,RIP),具有多种生物学效应，主要包括免疫 调节、抗肿瘤、抗病毒等作用［1］。目前，TCS的抗肿瘤研 究主要集中在绒毛膜上皮癌、胃肠道肿瘤和白血病等方面 ［2?3］。本实验研究TCS对人宫颈癌H eLa细胞生长的抑 制作用，并从诱导细胞凋亡的角度探讨其抗癌作用，为药物 的进一步研究开发提供实验依据。 1材料与方法 试剂 MEM培养基和胎牛血清购自美国GIBCOBRL公司， 碘化丙啶及RNaseA(RNA酶)为Simga公司产品，噻唑蓝(MTT) 购自Amresco公司。二甲基亚讽(DMSO)购自Fluka公司，TC S购自上海金山制药厂。 细胞培养人宫颈癌HeLa细胞为本室传代保存，培养于 5%C02, 37°C湿化孵箱中。培养基MEM含10%FBS，U/L青霉 素，U/L链霉素，取对数生长期细胞待用。 细胞生长抑制实验采用噻唑蓝(MT T)还原法进行检测： 将Hela细胞接种于96孔细胞培养板内(每孔的细胞数为2 X 104个)，细胞贴壁后对照组换新鲜培养基，实验组换用含 有不同浓度T CS的培养基，置C02培养箱内分别培养24， 48, 72h,去上清，加入MTT溶液200 ul/孔，置C02培养箱 内培养4h，去上清，每孔加入200 u 1DMSO,轻度振荡后， 测定570 nm处光吸收值。取8孔吸收值平均数，按公式细胞 抑制率(%) = (1_实验组平均吸光度值/对照组平均吸光度值) X 100%计算药物对细胞生长的抑制作用。 细胞凋亡的检测 细胞形态学观察将处于指数生长期的Hela细胞以不 同浓度的TCS处理后，倒置显微镜下观察Hela细胞的形态 改变。 DNA琼脂糖凝胶电泳胰蛋白酶消化收获实验组及对照细 胞，1000r/min离心5m in,PBS清洗细胞两遍，NP40溶液作用 细胞沉淀，