第1部分 生物化学技术概论.docVIP

第一部分 生物化学技术概论 本部分内容为生物化学实验中所涉及的主要技术原理、实验记录和实验报告的书写，介绍如何正确记录实验过程及书写实验报告的一般规则，是训练学生进行正规实验操作的重要内容。普通实验技术包括玻璃仪器的洗涤、洗液的配制、吸量管的使用、样品的混匀以及过滤、离心等一般实验室技术。实验样品的制备着重讨论在生物化学实验中，血液、尿液、样品及组织材料的采集和处理，匀浆制备和组织浸出液制备。离心分离技术、电泳原理、分光分析、层析分析和放射性同位素技术，重点讨论这些重要技术的原理，内容则尽可能简洁扼要，作为具体实验内容的参考。 §1 实验记录和实验报告的书写 实验是在理论指导下的科学实践，目的在于经过实践，掌握科学观察的基本方法和技能，培养学生的科学思维、分析判断和解决实际问题的能力，也是培养探求真知、尊重科学事实和真理的学风，以及培养科学态度的重要环节。为此，要求学生在实验之前必须预习、理解基本原理和实验基本操作步骤、注意事项，列出所需试剂和仪器，实验中组织安排好时间，严肃认真地进行操作，细致观察变化，如实作好记录、书写实验报告等。 一、实验记录 1. 实验记录要整洁、字迹清楚。 2. 实验中观察到的现象、结果和数据，要及时地直接记在记录本上，原始记录必须准确简练、详尽、清楚。 3. 记录时，应做到如实正确记录实验结果，不可夹杂主观因素。在实验条件下观察到的现象，也应如实仔细地记录下来。在定量实验中观察到的数据，如称量物的重量、滴定管的读数、分光光度计的光密度值等，都应设计一定的表格准确记录，并应根据仪器的精确度准确记录有效数字。要求对实验的每个结果都应准确无遗漏地做好记录。 4. 实验中使用仪器的类型、试剂的规格、化学反应式、分子量、浓度等，都应记录清楚。 5. 实验过程中，应一丝不苟，努力培养严谨的科学作风。 6. 完整的实验记录应包括日期、实验题目、目的、操作、结果等。 二、实验报告 1. 实验结束后，应及时整理和总结实验结果及记录，写出实验报告。 2. 实验报告应包括实验名称、实验日期、目的要求、原理、试剂配制、仪器设备、操作方法、实验结果、讨论等项内容。 3. 书写实验报告时，目的和要求、原理以及操作方法部分应作简单扼要的叙述，但对实验条件和操作的关键环节必须写清楚。对于实验结果部分，应根据实验的要求，把所得的实验结果和数据进行整理、归纳、分析和对比，并尽量总结成各种图表，如标准曲线图以及实验组与对照组实验结果的比较表。还应针对实验结果进行必要的说明和分析。讨论部分不是对结果的重述，而是对实验方法、实验结果和异常现象进行探讨和评论，以及对于实验设计的认识、体会和建议。 4.一般实验，要有结论，结论要简单扼要，说明本次实验所获得的结果。 §2 普通实验技术 一、玻璃仪器的洗涤与清洁 玻璃仪器是生物化学实验中不可缺少的器具，玻璃仪器的清洁与否，直接影响实验效果的准确性。因此，玻璃仪器的清洁工作是很重要的。 （一）新购玻璃仪器的清洗 新购来的玻璃仪器，其表面附有游离碱质，可先用肥皂水洗刷，再用流水冲洗,浸泡于1~2％ HCl中过夜，再用流水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2~3次，在干燥箱中烤干或晾干备用。 （二）使用过的玻璃仪器清洗 1. 一般玻璃仪器：如试管、烧杯、锥形瓶等，先用自来水洗刷至无污物，再选用大小合适的毛刷蘸取洗衣粉或肥皂水，将器皿内、外壁细心刷洗，再用自来水冲洗干净，洗至容器内壁光洁不挂水珠为止，最后用蒸馏水冲洗2～3次，倒置在清洁处晾干，急用时可用干燥箱烤干。 2. 容量仪器：吸量管、滴定管、容量瓶等，使用后应立即浸泡于清水中，勿使玷污物质干涸，并及时用流水冲洗干净，稍干后再用铬酸洗液浸泡数小时，然后用自来水反复冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗2～3次，晾干备用。 3. 比色杯：用毕立即用自来水反复冲洗干净。如洗不净时，可用盐酸或适当溶剂冲洗，再用自来水冲洗干净。切忌用试管刷、粗糙的布或纸擦洗，以免损坏比色杯透光度，亦应避免用较强的碱液或强氧化剂清洗，洗净后，倒置晾干备用。 二、清洗液的原理和配制 （一）肥皂水、洗衣粉溶液和去污粉，是最常用的洗涤剂，有乳化作用，可除去污垢，能使脂肪、蛋白质及其它粘着性物质溶解或松弛，一般玻璃仪器可直接用肥皂水浸泡或刷洗。 （二）铬酸洗液 1. 原理：铬酸洗液由重铬酸钾（或重铬酸钠）和浓硫酸配制而成，其清洁效力主要应用其强氧化性和强酸性。铬酐越多，硫酸越浓，其清洁效力也就越强，当洗液变绿色后则不宜应用。 K K2Cr2O7＋H2SO4 H2Cr2O7＋K2SO4 2CrO3铬酐（红色）＋H2O Cr2O3(绿色)＋3(O) H2SO4 H2O＋SO2＋(O) 2. 配制：称