重组β-环糊精葡萄糖基转移酶生产β-环糊精的工艺条件-生物技术通报.PDF

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2014 8 重组 β-环糊精葡萄糖基转移酶生产 β-环糊精的 工艺条件优化 1，2 1，2 1，2 1，2 杨玉路   王蕾   陈晟   吴敬 （1. 江南大学 食品科学与技术国家重点实验室，无锡 214122 ；2. 江南大学生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，无锡 214122） 摘 要 ： 将来自于Bacillus circulans 251 的β-CGTase 编码基因克隆到表达载体pET-20b（+），转化Escherichia coli BL21（DE3）。 经酶活检测培养基上清中的β-CGTase 酶活为20 U/mL。对酶转化淀粉生成β-环糊精的反应条件进行了优化，结果表明，当底物马 铃薯淀粉浓度 15%，反应初始pH5.5，温度30℃，加酶量 10 U/g 干淀粉，环己烷浓度2.5%-5%（V/V），转化周期24 h，β-环糊精 转化率达到最高值75.3%，是国内外报道的酶法生产β-环糊精的最高水平。 关键词 ： 环糊精葡萄糖基转移酶 β-环糊精 酶转化 重组表达 淀粉 Optimization of β-cyclodextrin Production by Recombinant β-cyclodextrin Glycosyltransferase Yang Yulu1，2 Wang Lei1，2 Chen Sheng1，2 Wu Jing1，2 （1. State Key Laboratory of Food Science and Technology ，Jiangnan University ，Wuxi 214122 ；2. School of Biotechnology and Key Laboratory of Industrial Biotechnology Ministry of Education ，Jiangnan University ，Wuxi 214122 ） Abstract:  The βcgt gene encoding β-CGTase from Bacillus circulans strain 251 was cloned into the expression vector pET-20b（+）. The vector was then transformed into Escherichia coli BL21（DE3）for extracellular production of β-CGTase. The activity in the supernatant of recombinant E. coli BL21（DE3）was 20 U/mL. Furthermore, the condition for β-cyclodextrin（β-CD）preparation by this recombinant β-CGTase was optimized. At 15% potato starch, pH5.5, 30℃, 2.5%-5%（V/V）cyclohexane, 10 U β-CGTase per gram substrate incubated for 24 hours, 75.3% of the starch was transformed into β-CD. This is the highest level of β-CD conversion by enzyme method at home and abroad. Key words:  Cyc