质粒DNA的提取、纯化及鉴定.docVIP

WORD格式可编辑 专业技术 资料整理 质粒DNA的提取、纯化与鉴定 摘要：本实验利用碱变法从大肠杆菌DH5（E.coli DH5）中提取pUC19质粒，旨在学习并掌握质粒DNA提取的原理、纯化和检测方法及琼脂糖凝胶电泳技术。同时通过对质粒DNA的提取、纯化过程及电泳图谱的分析，探讨碱变法提取高质量质粒DNA的关键步骤及影响所提质粒纯度和量的相关因子。 关键词：碱变法 质粒 电泳 实验目的： 学习并掌握凝胶电泳进行DNA的分离纯化的实验原理。 学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。 学习并掌握凝胶中DNA的分离纯化方法。 掌握碱变性提取发的原理及各种试剂的作用。 掌握碱变性法提取质粒DNA的方法。 实验原理： 质粒DNA的提取——碱变性提取法： 提取和纯化质粒DNA的方法很多，目前常用的有：碱变性提取法、煮沸法、羟基磷灰石柱层析法、EB-氯化铯密度梯度离心法和Wizard法等。其中，碱变性提取法最为经典和常用，适于不同量质粒DNA的提取。该方法操作简单，易于操作，一般实验室均可进行。提取质粒DNA纯度高，可直接用于酶切、序列测定及分析。EB-氯化铯密度梯度离心法，主要适合于相对分子质量与染色体DNA相近的质粒，具有纯度高、步骤少、方法稳定，且得到的质粒DNA多为超