第二十四章免疫诊断免疫学检测技术已广泛应用于医学和生物学领域.PDF

第二十四章 免疫诊断 免疫学检测技术已广泛应用于医学和生物学领域的研究。在临床医学中，免疫学 检测可用于免疫相关疾病的诊断、发病机制的研究，病情监测与疗效评价等。如传染 病、免疫缺陷病、自身免疫病、肿瘤、移植排斥反应、超敏反应等。随着免疫学理论 的进展和相关技术的发展，检测技术也不断发展和更新，新方法层出不穷。本章仅介 绍免疫诊断常用技术的原理、基本步骤及其应用。 第一节 抗原或抗体的检测 一、抗原抗体反应的原理 抗原与抗体发生结合反应的物质基础是抗原的抗原决定基与抗体的抗原结 合部位之间的结构互补性，二者相互结合，在经典的凝集试验及沉淀试验中，有 盐离子存在时，多分子聚合，如分子比例恰当出现肉眼可见反应。 （一）抗原抗体反应的特异性 一种抗原一般只能与由它刺激所产生的抗体结合，这种抗原抗体结合反应的 专一性即特异性。抗原抗体结合力的大小，常用亲和力 （affinity ）或亲合力 （avidity ）来表示，前者指抗体分子上一个抗原结合部位与相应的抗原决定基之 间的结合强度，后者指一个抗体分子与整个抗原之间的结合强度。抗原与抗体的 结合为非共价的可逆结合，它们空间构象的互补程度不同，结合力强弱也不同， 互补程度越高，亲和力越高。此外，反应的条件与抗原抗体的结合力也有关系。 例如适宜的温度、酸碱度、离子强度等能促进抗原抗体分子的紧密接触，增强分 子间引力，促进分子间相互结合。 用已知抗原免疫人或动物后，机体会产生特异性抗体存在于血清中，这种抗 体在实验中常称为第一抗体（简称一抗）。由于Ig 有同种型抗原特异性，将人 Ig 免疫动物，或将动物 Ig 免疫异种动物可制备出抗抗体，又称第二抗体（简称二 抗）。用上述免疫接种方法制备的血清习惯上称为抗血清(antiserum) 。抗血清在 免疫学检测中十分常用。例如，用某种细菌免疫家兔制备的抗血清含有一抗，而 将兔血清 Ig 免疫绵羊可制备出羊抗兔 Ig 血清，即二抗。在检测标本中的某种细 菌时，可单独使用一抗，因为一抗与该细菌的结合是特异的；也可在使用一抗后 再加用二抗，通过二抗与一抗特异性结合，来检测一抗所识别的细菌。 （二）抗原抗体反应的可见性 天然抗原分子表面一般有多种抗原决定基，每种抗原决定基又可有多个，可 提供多个抗体分子结合的部位，因此称为多价。抗体分子若是单体 Ig 则仅有两 个 Fab ，能结合两个相同的抗原决定基，则为两价。在抗原抗体反应中，如果不 考虑抗原抗体的数量比例，则很可能出现抗原或抗体过剩。由于过剩一方的结合 价不能满足，大多呈非结合的游离状态存在，结果只有小分子的复合物形成，不 能被肉眼察见，无法判定结果。当抗原抗体的数量比例恰当时，抗体分子的两个 Fab 分别结合两个抗原分子，相互交叉连接成网格状复合体，反应体系中基本无 游离的抗原或抗体，此时，有明显的反应物（沉淀物或凝集物）形成，肉眼可见。 因此，在进行凝集反应或沉淀反应时，确定抗原抗体的最适比例十分重要。 在抗原抗体反应中，可用已知抗体检测未知抗原，也可用已知抗原检测未知 抗体，并可根据需要选择定性或定量的测定方法。 二、抗原或抗体的检测方法 根据抗原的性质、出现结果的现象、参与反应的成分不同，可将抗原抗体反 应分为凝集反应、沉淀反应、补体参加的反应、采用标记物的抗原抗体反应等。 （一）凝集反应 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集团块，这一类反应称 为凝集反应(agglutination) 。该类反应可检测到 1 μg/ml水平的抗体。 1. 直接凝集 将细菌或红细胞与相应抗体直接反应，出现细菌凝集或红细 胞凝集现象。一种方法是玻片凝集试验，用于定性测抗原，如 ABO 血型鉴定、 细菌鉴定。另一种方法是试管凝集试验，在试管中系列稀释待检血清，加入已知 颗粒性抗原，用于定量检测抗体，如诊断伤寒病的肥达氏凝集试验（Widal agglutination test ）。 2. 间接凝集 将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反 应出现颗粒物凝集的现象。例如，用γ球蛋白包被的乳胶颗粒检测病人血清中的 一种抗人γ球蛋白的抗体（类风湿因子）。也可用已知抗体包被乳胶颗粒，检测 标本中的相应抗原。此外，有一种抗球蛋白试验(antiglobu