铁皮石斛组培苗的研究进展.doc

铁皮石斛组培苗的研究进展 　　1 铁皮石斛生物学特征 　　铁皮石斛（Dendrobium candidum Wall.ex Lindl）是兰科石斛属多年生附生草本植物，俗称铁皮兰、黑节草，是我国名贵的传统中药材之一，位于“九大仙草”之首，同时也是一种重要的花卉植物[1]。其生物学特征为：茎直立，圆柱形，通常长20～35cm，直径2～4cm；幼嫩茎长5～7cm，肥壮饱满，可粗达8mm；长茎着花时略弯垂。叶3～5枚，生于茎上部节上，二列，矩圆状披针形，纸质，长3～4（～7）cm，宽9～11（～15）mm，先端钝。花序生于无叶的茎上部节上，花序轴稍折曲，长2～4cm，2～3花：花直径1.5～2cm；萼片花瓣淡黄绿色或白色，唇瓣白色而在上部是1个紫红色大斑块，下部两侧是紫红色条纹；中萼片与花瓣相似，矩圆状披针形，长1.7～1.9cm，宽4～5mm；萼囊圆锥形，长5mm；唇瓣卵状披针形，长1.6cm；不明显3裂或不裂；唇盘上密被乳突状短柔毛，基部有1枚绿黄色胼胝体。花期3～6月[2]，[3]，主要分布于西南和江南各省。铁皮石斛的药用部分是新鲜或干燥茎，具有益胃生津、滋阴清热、润肺止咳和清热明目的功效，还具有增强人体免疫力和抗肿瘤等作用[4]。铁皮石斛的种子极小、无胚乳，自然条件下需与某些真菌共生才能萌发，很难用实生苗栽培[5]；而传统的分株、扦插等方式的繁殖率极低，同时由于长期不合理的开发利用，致使其野生资源日渐枯竭，甚至面临绝种的危险，被国家列为重点保护的药用植物之一。 　　2 铁皮石斛组织培养技术 　　铁皮石斛种子细如粉末，又缺乏胚乳，需在适宜的环境与真菌共生才能萌发[6]，自然繁殖率极低，生长周期长。只有通过组织培养技术实现铁皮石斛快速繁殖以满足市场需求。 　　组织培养一般采用野生铁皮石斛植株种子、茎尖和茎段等作为外植体，接种到培养基上，以原球茎的增殖和分化来培养种苗。从细胞到微苗、幼苗、壮苗，周期约1年。 　　在铁皮石斛规模化生产上，主要以种子为外植体进行组培繁殖，谢启鑫[7]等以种子萌发形成原球茎，再由原球茎增殖、分化，最终经过培养形成幼苗。其优势在于种子培养的量大，一颗果实能培养出近2万株栽培苗，其次是种子培养下，植株的变异性小，能很好地保持亲本的优良性状。 　　王丽萍[8]、张启香[9]以茎段或茎尖诱导原球茎，通过原球茎的增殖分化从而获得大量的铁皮石斛幼苗。秦廷豪[10]以铁皮石斛无菌苗分成的茎段、带顶芽的茎段和根茆在MS+6BA0.5mg.L-1+NAA0.2mg.L-1上均能诱导出丛生芽，只有根茆能诱导原球茎，且诱导丛芽倍数高于其他2类。李进进[11]、张书萍[12]以铁皮石斛带芽茎段或腋芽作为外植体诱导原球茎，通过原球茎的增殖分化从而获得大量的铁皮石斛幼苗。 　　组织培养技术中选择合适的培养基是关键。MS、N6、B5、KC、VW等基本培养基均可用于石斛离体组织培养[13]。李璐等[14]研究表明，1/2 MS培养基适宜铁皮石斛壮苗生根培养，并且是诱导铁皮石斛试管开花的最优培养基。刘骅等[15]研究结果表明，B5和1/2MS较适宜铁皮石斛的壮苗培养。 　　铁皮石斛组培苗生长缓慢，成苗周期长。促进原球茎的分化速度，提高分化率，是缩短育苗周期的一个重要环节。蒋波[16]等研究结果表明，培养基中激素配比是影响原球茎增殖分化的关键因素，并以1/2MS添加BA2.0mg.L-1+NAA0.2mg.L-1或BA3.0++NAA0.2mg.L-1的培养基有利于原球茎的分化。蒋林[17]等在实验中得出原球茎分化的适宜培养基为1/2MS+6BA 0.5 mg.L-1+活性炭 0.5 g.L-1。 　　铁皮石斛组培工作的目的是将组培苗应用于实际生产栽培中，因此组培苗的健壮、整齐、高大及根系的发达与否，直接影响到整体的经济收益。刘骅[15]等在MS培养基研究了20mg/L 1AA、NAA和IBA对幼苗生长的影响，加NAA比加IAA或加IBA肚对照组的苗更高、苇较粗、叶色浓绿、根系较发达。罗吉凤[18]等通过大量试验指出试验苗在MS+香蕉泥20%+蔗糖2%培养基上，大约60d苗快速长高，茎粗壮且根系发达；谢启鑫[7]等认为分化的原球茎在MS+NAA 0.5mg/L+20% 香蕉汁+活性炭5g/L的培养基上易于诱导不定根的形成，60d后可形成健壮的完整小植株；蒋慧萍[19]等提出化化苗在1/2MS+NAA 1mg/L+IBA 1mg/L+土豆泥10%+蔗糖 3%或1/2MS+NAA 2mg/L+香蕉泥10%+蔗糖3%培养基上生根，出根快，茎粗壮，根系发达。 　　3 铁皮石斛栽培技术 　　在基质方面，铁皮石斛组培苗在水苔、树皮、砂、珍珠岩和碎石这5种基质中，存活率均较高，达90%以上。锯木屑、苔藓、树皮3种基质，有利于试