实验SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量.ppt

实验四、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 一、实验目的 学习SDS测定蛋白质分子量的原理。 掌握垂直板电泳的操作方法。 运用SDS测定蛋白质分子量及染色鉴定。 二、实验原理 带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移动，这种现象称为电泳。 区带电泳是在半固相或胶状介质上加一个点或一薄层样品溶液，然后加电场，分子在支持介质上或支持介质中迁移。 支持介质的作用：防止机械干扰和由于温度变化以及大分子溶液的高密度而产生的对流。 聚丙烯酰胺凝胶的聚合反应 单体：丙烯酰胺（Acr） 交联剂：甲叉双丙烯酰胺（Bis） 催化剂：过硫酸胺 加速剂：四甲基乙二胺（TEMED） 产物：三维网状结构的凝胶 PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类。 连续电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应分离。 不连续电泳系统中缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度具有不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，所分离条带清晰度及分辨率较好。 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基磺酸钠）。 SDS与蛋白质结合后引起蛋白质构象的改变。SDS-蛋白质复合物的形状近似于长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，而长轴则随蛋白质相对分子质量成正比变化。 当SDS与蛋白质结