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马拉硫磷降解菌的研究初报 　　摘要：试验从延安宝塔区和安塞县等地长期喷施马拉硫磷的土壤中分离得到１５株可降解马拉硫磷的菌株，其中菌株ＭＮ－１３在３２ ℃、马拉硫磷浓度为２．０ ｍＬ／Ｌ、第六天时，对马拉硫磷的降解率最高，可达９２．３０％，马拉硫磷的转化与该菌株的生长规律存在相关性。 　　关键词：马拉硫磷；降解；菌株 　　中图分类号：S154.3文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）18－3708-03 　　 　　Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｎ ｔｈｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｍａｌａｔｈｉｏｎ－ｄｅｇｒａｄｉｎｇ Ｓｔｒａｉｎｓ 　　 　　ＧＡＯ Ｘｉａｏ－ｐｅｎｇ，ＭＡ Ｎａ－ｎａ，ＹＡＮＧ Ｊｉａ－ｊｕａｎ 　　（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｙａｎ’ａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｙａｎ’ａｎ ７１６０００，Ｓｈａａｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｆｉｆｔｅｅｎ ｓｔｒａｉｎｓ that ｃｏｕｌｄ ｄｅｇｒａｄａｔｅ ｍａｌａｔｈｉｏｎ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｏｉｌ which had been ｓｐｒａｙed ｍａｌａｔｈｉｏｎ for a ｌｏｎｇ ｔｉｍｅ． Ｔｈｅ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒｉａｎ （ＭＮ－１３） ｏｎ ｔｈｅ ｓｉｘｔｈ ｄａｙ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ （９２．３０％） ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ３２ ℃， ｍａｌａｔｈｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ２．０ ｍＬ／Ｌ． Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｌａｔｈｉｏｎ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｒｕｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： malathion； degradation； stain 　　 　　马拉硫磷又名四零四九，属低毒杀虫剂，具有良好的触杀和一定的熏蒸作用，在农业生产中普遍使用，近年来马拉硫磷的产量和使用量剧增，引发的环境问题令人担忧。大量使用的难降解农药在土壤中不断积累，残留农药经过植物进入食物链后最终在人体内富集，给人类造成严重的危害［１－４］。目前我国受残留农药污染的土地面积大，传统的化学处理方法费用高且会造成新的污染，如何利用微生物的强大分解作用来降解土壤中的残留农药，对改善农产品的品质、提高人民生活水平具有重大的研究价值。我们从陕北长期使用马拉硫磷的土壤中筛选得到可以降解马拉硫磷的菌株，对其降解性能进行了研究，以期为该类农药残留的生物降解提供科学方法。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　１．１．１供试土样采自延安宝塔区和安塞县长期喷施马拉硫磷的田地。 　　１．１．２培养基ＬＢ培养基、马拉硫磷无机盐培养基［３］：ＮａＮＯ３ ２．０0 ｇ、ＫＣｌ ０．５０ ｇ、ＭｇＳＯ４ ０．０２ ｇ、ＣａＣｌ２ ０．０４ ｇ、马拉硫磷（马拉硫磷浓度可根据需要调整）、去离子水１ ０００ ｍＬ，ｐＨ值６．５。 　　１．１．３供试农药、试剂和仪器供试农药：２５％马拉硫磷乳油（广西禾泰农药有限责任公司）。试剂：钼酸铵（分析纯，南京化学试剂有限公司）、氯化亚锡（分析纯，如皋市天成化工有限公司）、Ｐ２Ｏ５（分析纯，南京化学试剂有限公司）等。仪器：隔水式电热恒温培养箱（ＰＹＸ－ＤＨＳ－４０×５０－ＢＳ，上海跃进医疗器械厂）、紫外分光光度计（ＵＶ－１２４０，日本岛津）、立式压力蒸汽灭菌锅（ＬＳ－Ｂ５０Ｌ，江阴滨江医疗仪器厂）。 　　１．２方法 　　１．２．１马拉硫磷降解菌的筛选［５－１１］ 　　１）富集。常规方法在选取的采样点采集土样、混匀，制成菌悬液，无菌操作接种于ＬＢ培养基中，３２ ℃、１６０ ｒ／ｍｉｎ培养３ ｄ。 　　２）初筛。将富集得到的菌液以５％的接种量接种到马拉硫磷无机盐培养基中（马拉硫磷浓度依次为０．５、１．０、１．５、２．０ ｍＬ／Ｌ），３２℃、１６０ ｒ／ｍｉｎ培养１６ ｄ，取最后一次培养的菌液涂布于ＬＢ平板上，划线分离得到单菌落，转管保藏于４℃冰箱备用。 　　３）复筛。将保存的菌株接到液体马拉硫磷无机盐培养基中，３２ ℃、１６０ ｒ／ｍｉｎ培养２４ ｈ，测定ＯＤ６００。选出生长情况好的菌株作为下一步的试验菌株。 　　１．２．２马拉硫磷降解率的测定 　　１）无机磷标准曲线的绘制。无机磷标准曲线的绘制利用磷钼蓝比色法［１２］，以无机磷浓度为横坐标，以ＯＤ６９０为纵坐标，绘制磷标准曲线。 　　２）马拉硫磷降解率的测定。对复筛得到的菌株接种到ＬＢ液体培养基中，３２ ℃、１６０ ｒ／ｍｉｎ培养，２ ｄ后以５％的接种量接种到马拉硫磷浓度为２．０ ｍＬ／Ｌ的无