常见的重组蛋白药物一般生产工艺与质量控制要点.pptVIP

注射用重组人Tα1与125Ser质控标准 * 注射用重组人白介素-2（125Ser)的质量控制标准 成品质量标准 检测项目 鉴别实验 外观 可见异物 装量差异 水分 pH值 生物学活性 无菌检查 细菌内毒素 异常毒性检查 乙腈残留量 渗透压摩尔浓度 残余抗生素活性 不溶性颗粒 合格标准 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 ≤3% 6.5-7.5 80-150% 符合规定 ≤10EU/支 符合规定 ≤0.0004% 符合规定 符合规定 符合规定 * 问题与解答 * THANKS A LOT! 培训习题 1、胸腺肽a1与白介素-2（125Ser）纯化工艺中用到哪些层析方法？ 2、甘露醇在胸腺肽a1冻干过程中起到什么作用？ 3、简述共熔点的定义？ 4、质粒稳定性检查的意义？ 5、注射用重组人白介素-2（125Ser）活性检测用什么方法？ 6、注射用重组人白介素-2（125Ser）大肠杆菌表达质粒的名称？ 7、胸腺肽a1生产中切割融合蛋白的酶是什么酶？ 8、乙腈属于第几类有机溶剂？ 9、注射剂检查中：与2005版药典相比，2010年版本药典中新增加了哪些检查项目？ 10、白介素-2（125Ser）与胸腺肽a1的给药方式有哪些？ * 重组蛋白药物质控要点 原液：分子量检测 分子量是蛋白质理化性质之一。一般采用还原型SDS法测定，蛋白质在SDS和B-巯基乙醇存在下沸水浴5min，形成表面带大量负电荷的杆状分子，降低了分子形态和电荷的影响，在电泳过程中蛋白迁移率基本只与其分子量相关，目前广泛用于蛋白分子量的测定。该法具有简便，快速，直观等特点，目前作为基因工程药物原液检定的常规方法。该法可将蛋白质按分子量大小进行分离，因此，可用于蛋白质纯度分析，同时还能对聚合体进行分析。 * 重组蛋白药物质控要点 原液：紫外光谱扫描检测 这是基因工程药物的一个重要物理常数，对于一个蛋白质来说，它的最大吸收波长是固定的。对某一重组蛋白质来说，其最大吸收波长是固定的；在生产过程中每批产品的紫外吸收光谱应当是一致的。测定时以生理盐水为对照，在200～350 nm范围内对待检样品溶液进行扫描，每批制品紫外吸收图谱应与对照品一致且在280nm附近最大吸收波长应与理论值相符。 * 重组蛋白药物质控要点 原液：肽图检测 肽图分析是DNA产品质控的重要手段之一。通过肽图分析，可从一级结构研究重组产品与天然品的同质性。重组产品与天然产品具有相同的指纹图谱，它们具有相同的一级结构。进一步验证了它们的同质性。 大多基因工程产品都将肽图分析作为控制其一致性的重要常规指标之一，而采用的方法中．又以HPLC肽图分析最为多见。肽图谱对每一种蛋白质来说是特征和专一的。因此可用于检查各批产品蛋白质一级结构的一致性在肤图分析中的应用基因重组药物的肽图分析是评价基因重组制品和天然蛋白质的同一性以及不同批制品间同一性的重要手段，也是证明细胞遗传稳定性的有效手段之一。 * 重组蛋白药物质控要点 原液：等电点检测 不同蛋白质由于某些带电氨基酸带负电荷的Glu，Asp和带正电荷的Lys，Arg,His等的存在，其净电荷各不相同，即等电点各不相同。均一的蛋白质只有一个等电点，有时因加工修饰等影响可出现多个等电点，但应有一定的范围。所以等电点测定是控制重组产品生产工艺稳定性的重要指标。 * 重组蛋白药物质控要点 原液： N-末端氨基酸序列测定 可以确证表达产物的编码准确性。对蛋白质的全氨基酸序列分析，难度大，耗时长，从统计学观点只要测定N-末端15个氨基酸便可保证其顺序的正确性。故N-末端15个氨基酸序列分析可作为重组蛋白质的重要鉴别指标。 * 重组蛋白药物质控要点 原液：外源性DNA含量检测 宿主细胞DNA只作为一种细胞污染因素而不作为一种危险因素。目前均采用DNA杂交实验，用固相斑点杂交法，以地高辛标记检测试剂盒或者用同位素标记DNA探针进行测定，必须提供相应宿主细胞DNA标准品。由于设备和消耗试剂昂贵，一定程度限制了该方法的普及。 由于基因工程药物的生产过程中所使用的各种表达系统中都含有大量的DNA。因此世界各国的药品管理机构都对基因工程药物中所允许的DNA残余量严加限定。WHO和FDA将此限量定在100pg／剂量。参照药典三部附录IX B外源性DNA残留量测定法每1次人用剂量应不高于10ng。 * 重组蛋白药物质控要点 原液：宿主菌蛋白残留量检测 如在临床使用中需要反复多次注射的药品，则需要做残余菌体蛋白含量测定，所用方法以双抗体夹心ELISA为宜，尽量不用点免疫。因为用点免疫测菌体蛋白含量，实验结果不客观，主要是因为检品和菌体蛋白标准难以在同等条件下进行直接点膜，当检品浓度较高时，在硝酸纤维膜上形成一定厚度的样品模块，影响了菌体