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第11章 环境微生物检测; (2) 自然沉降法 自然沉降法是靠重力的作用将空气中携带微生物的悬浮颗粒沉陷到直径9cm的营养琼脂培养基平皿上，经37℃，48h培养后计生长的细菌菌落数。 ; 由于沉降法是被动采样，会造成很大的误差。通过前苏联奥梅梁斯基公式换算出。; 通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为1个采样点，该交点与四墙角连续的中点为另外4个采样点。采样高度为1.2～1.5m。采样点心远离墙壁1m以上，并避开空调、门窗等空气流通处。检测点数越多越准确，以20～30个测点数为宜，最少测点数为5～6。 ;(3)过滤法 过滤法是在负压下抽滤空气，使空气通过经灭菌的微孔滤膜，空气中细菌被截留在膜上，然后将膜转移到培养基上，使滤膜与培养基完全贴紧，倒置于37℃恒温箱培养24h。通过计平板上的菌落数，测定空气中细菌的数量。; 空气中微生物??数目前用CFU／m3，计量。即每立方米空气落下的细菌数，一般以室内空气中细菌总数500－1000 CFU／m3以作为空气污染指标。;日本建议的评价空气清洁程度的标淮见表 ;11.2 水的微生物检测及控制11.2.1 水质的细菌学检测;一、伤寒杆菌;二、痢疾杆菌;三、霍乱弧菌;四、寄生虫;11.2.2 水质指示微生物——大肠菌群; 这些寄生菌通常与人体构成互利共生关系，当人体免疫力下降时，他们则有可能成为引起肠炎的致病菌，他们中的个别变种还会变为极具毒性的病菌。 如大肠埃希氏菌可引起幼儿腹泻，引起美国和日本传染病流行的O-157也是大肠埃希氏菌的变种菌株。 ;中国水质标准中规定的大肠菌群数(个／L) 饮用水 ≤3 游泳池水 ≤ 100 地表水 第一级 ≤ 500 第二级 ≤ 10000 第三级 ≤ 50000 ;11.2.2.1 大肠菌群检测的目的和原理;11.2.2.2 大肠菌群的检测方法;A.初发酵;试验中的培养基中加入了酸碱指示剂紫色的溴甲酚紫，产酸时指示剂变黄，同时培养基中口朝下放置了装满同样培养基的小试管，产气时小试管中会封闭一段气体，被作为培养中是否产气的依据。;目的：鉴定产酸产气菌的染色特征、好氧与否、芽孢特征。 根据：大肠菌群在固体培养基上可以在空气生长，革兰氏染色呈阴性和不生芽孢的特性;复发酵;C.复发酵;（2）膜滤法 使用的滤膜是孔径为0.45～0.65μm的微孔滤膜；转移至伊红美兰平板上。;11.2.3 水微生物污染的控制 控制水体微生物的污染首先必须从源头做起，即控制排放废水，尤其是医院废水等微生物的含量,避免大量有害微生物进入水体； 其次，消除微生物兹生的环境。净化水体，对地表水、游泳池水要进行定期检测，必要时加入消毒剂以杀灭微生物。 ;11.3 发光细菌的微毒检测;11.3.1 发光细菌检测的原理;;11.3.2 发光细菌法检测的操作; ②冷冻干燥发光细菌制剂测定法 即把培养到对数生长期的发光细菌，以冷冻干燥法制成干粉剂，使用时加入冷的2％NaCl溶液复苏，使其恢复到原来的生理状态和发光水平，然后用于测定。这是国家标准方法，其优点是可实行测定的质量控制。冻干粉可长期保藏方便使用，操作简便，节约时间。;11.3.3 发光细菌法的应用;11.4 污染物致突变性检测（Ames）试验;11.4.1 Ames试验的原理和方法;(1)试验菌株 采用鼠伤寒沙门菌变异株TA97，TA 98，TAl00，TAl02四种菌种，又增加了TA1535，TA1537，TA1538共七株。;(2)试剂 牛肉膏蛋白陈培养基 牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g．Nacl 5.0g,水 1000mL.pH7.2~7.4 S9mix 大鼠肝匀浆S9与NADP、G-6-P、KCl、Na2 HPO4、KH2PO4和水配成混合液。 ;(3)菌种鉴定 在试验之前都要进行全面的生物学特性和敏感性鉴定，符合要求才能使用。 ①脂多糖屏障丢失 判定是否是缺陷型 ②R因子 判断菌体是否存在或失去了某种 抗药性质粒。 ③紫外线损伤修复缺陷;④自发回变 ⑤回变特性——