金属离子对柔红霉素与人血清白蛋白相互用途的影响.docVIP

PAGE PAGE 4 金属离子对柔红霉素与人血清白蛋白相互作用的影响 华南农业大学 理学院 06应用化学 陈伟锐南农业大学 理学院 06应用化学 林谋宏南农业大学 理学院 06应用化学 谢哲铭 要 柔红霉素是蒽环类抗生素，是治疗急性白血病的首选药，也用于治疗各种癌症。本实验采用平衡透析法，结合紫外可见光分光光谱法研究柔红霉素与人血清白蛋白（）的相互作用。根据Langmuir等温吸附方程，得到柔红霉素与的结合常数。在此基础上，考虑不同金属离子的作用下，柔红霉素与结合的变化，通过数学模型研究金属离子对药物与蛋白作用过程中的影响。本实验在综合文献方法和结合实验条件的基础上,对药物小分子与人血清白蛋白相互作用进行探讨，并对生理条件下金属离子与药物作用机理进行研究，能够对药物生产起到一定的作用。 关键词 柔红霉素 人血清白蛋白 平衡透析 可见光吸收 1 前言 研究药物分子与蛋白质的作用，对理解蛋白质结构与功能的关系以及阐明药物动力学、耐药性和毒副作用的机理有着重要的意义。随着科学的进步和技术方法的发展，这方面的研究内容也在不断深入。 蛋白质分子中的色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸等氨基酸残基都具有特殊的光学活性。许多药物分子本身也具有光学活性，或与蛋白质分子结合后产生光学活性，因此用光谱方法通过蛋白质分子结合药物分子后结构的变化研究结合机理，是有效和广泛的方法。紫外-可见光谱法也是研究药物与生物分子相互作用机理最常用、最方便的方法，因为有效药物与生物分子结合后，它们的吸收光谱会有一定的改变，出现吸收峰位移或谱峰宽度变化，由此可研究生物分子与药物间的结合强弱及结合机理。 柔红霉素（DNR，结构如图1所示）作为一种重要的蒽环类抗肿瘤抗生素，是目前治疗急性淋巴细胞性白血病和急性粒细胞性白血病的首选药，但长期使用这类药物使心肌肌原纤维失去肌球蛋白，引起不可逆的心力衰竭，限制了它在化疗中的广泛应用。因此，有关DNR心脏毒性的基础与临床研究成为重要的课题。对柔红霉素与血清白蛋白的 图 图1 反应和测定进行研究具有非常重要的现实意义。本实验采用平衡透析法，以紫外可见光分光光谱法研究柔红霉素与人血清白蛋白（）的相互作用。根据Langmuir等温吸附方程，得到柔红霉素与的结合常数。同时，考虑不同金属离子的作用下，柔红霉素与结合的变化，通过数学模型研究金属离子对药物与蛋白作用过程中的影响。以此来研究柔红霉素与的反应及其作用规律，为了解柔红霉素的人体作用机理和药物生产改进提供了实验依据。 2 实验目的 (1) 探究平衡透析与紫外分光法相结合研究药物小分子与HAS相互作用的方法； (2) 综合文献方法，进一步研究不同数学模型对实验数据的处理方法； (3) 研究柔红霉素与的相互作用，探讨不同金属离子的存在对其药效的影响，为了解其作用机理并改进生产工艺提供实验依据。 3 实验原理 3.1平衡透析法的实验原理 平衡透析法是利用与血浆蛋白结合的药物不能透过半透膜的特性进行测定的。此方法是将血清白蛋白置于透析袋内，将透析袋置于装有缓冲液的容器中。本实验采用的透析袋容许分子量小于14000的物质透过，可以让系统中游离的药物自然透过，而不能让蛋白质等大分子物质透过。实验中采用离心管作为透析的容器，将透析袋置于离心管中。当达到平衡后，透析袋内外游离型药物浓度相等，而透析袋内除含有游离型药物外，还保留了药物与蛋白质的结合物(即结合型药物)。若已知体系中药物总量，并且用适当的分析方法测定透析袋内药物总浓度和透析袋外游离型药物浓度，则可以通过透析袋内药物总浓度与透析袋外游离型药物浓度之差，计算药物与血浆蛋白的结合率。 (1) 式中，为透析袋外游离型药物浓度，为透析袋内药物总浓度。和可以由相应的吸光度通过6.1节建立的吸光度-浓度标准曲线求得。 3.2 柔红霉素含量的测定 根据柔红霉素的紫外-可见光扫描图可知，柔红霉素的最大吸收波长在(233±1)nm，(254±1)nm和(499±1)nm，本实验中柔红霉素的含量测定方法选择可见分光光度法，测定波长为499 nm。 3.3 根据Langmuir等温吸附方程求结合常数 在透析袋内浓度一定时，根据Langmuir等温吸附方程，即 (2) 其中是结合率，是结合常数，是柔红霉素的本体浓度。 并且 (3) 其中，是浓度不同时的柔红霉素与的结合量，，是在实验条件下即浓度一定时柔红霉素与的最大结合量。 因此，联合方程(2)和(3)可以得到