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EB病毒PCR定量检测李英辉 内容 一、EB病毒 二、EB病毒相关疾病 三、EB病毒与鼻咽癌 四、血浆EB病毒DNA水平与肿瘤负荷 五、上市产品情况 六、问题与方案 七、项目计划 一、 EB病毒 1964年Epstein、Barr在Burkitt淋巴瘤细胞系发现的第一个人类肿瘤病毒，又名人类疱疹病毒4型（HHV-4），是双连DNA病毒。 世界上90%以上的成人都曾感染过EBV，大多终身在体内以无症状、潜伏感染形势存在 二十世纪末被国际抗癌联盟列为Ⅰ类致癌物 二、 EB病毒相关疾病 肿瘤性疾病 Burkitt’s lymphoma 伯基特淋巴瘤 （地方性，100%） Hodgkin’s lymphoma霍奇金淋巴瘤（40%） Nasopharyngeal carcinoma鼻咽癌（地方性，100%） Gastric carcinoma胃癌（10%） 非肿瘤性疾病 Infectious mononucleosis传染性单核细胞增多症（100%） 三、EB病毒与鼻咽癌 鼻咽癌（NPC）属于地方性肿瘤，约80%的患者分布于中国华南地区及东南亚地区，发病率约为20-30/100 000人,广东省的发病率最高,又称“广东瘤” 鼻咽癌病因 1、遗传 2、EB病毒 3、环境 N Engl J Med. 2004 Jun 10;350(24):2461-70. 四、血浆EB病毒DNA水平与肿瘤负荷-----分期 Cancer Res. 2000 May 1;60(9):2351-5. 四、血浆EB病毒DNA水平与肿瘤负荷-----放疗过程中监控 四、血浆EB病毒DNA水平与肿瘤负荷-----术后监控 Clin Cancer Res. 2003 Aug 15;9(9):3254-9. 复发监控 N Engl J Med. 2004 Jun 10;350(24):2461-70. 四、血浆EB病毒DNA水平与肿瘤负荷 ------复发监控 OS vs Plasma EBV DNA Head Neck. 2012 Aug;34(8):1064-70 五、上市产品情况 公司 类型 灵敏度 线性范围 样品类型 样本用量 之江生物 定性 　 　 全血 　 艾康生物 定量 　 　 全血 　 普瑞康生物 定量 100IU/ml 　 血清或血浆 　 圣湘生物 定量 400拷贝/毫升 4.0×102~4.0×109 全血、血浆和咽拭子 血浆100ul,全血200ul,咽拭子500ul 达安基因 定量 500拷贝/毫升 　 血 　 鑫诺美迪基因 定量 　 　 血清或血浆 　 六、问题与方案 问题： 灵敏度 解决方案： 1、设计靶基因检测片段小于100bp 2、公司已有的血浆抽提方法 3、甘油保存校准品 七、计划 项目内容 项目指标 预期完成时间 查阅文献，EBV靶序列的选择 EBV保守区域序列人工合成 9月30 引物及探针设计 检测用引物、MGB探针设计合成 9月30 构建校准品质粒克隆 测序验证成功构建克隆菌 10月17 质粒抽提 质粒抽提、线性化 10月24 制备校准品 制备EBV校准品及内参校准品 10月31 引物及探针筛选 优化引物 11月7 阳性细胞株或阳性EBV DNA样本测试 阳性样本检出率100% 11月14