准东油田萘降解菌群培养及菌群双加氧酶基因多态性剖析.docVIP

准东油田萘降解菌群培养及菌群双加氧酶基因多态性剖析 　　摘要：采用无机盐培养基，以萘为惟一的碳源物质?ψ级?油田石油污染土壤中的萘降解菌进行液体富集培养。经过5次培养后，利用固体平板对获得菌群萘降解能力进行检测，同时利用HPLC对降解产物进行检测。离心收集富集培养基中的菌体，提取基因组DNA，基于Illumina Miseq测序平台对16S rRNA序列进行测序及生物信息学分析，同时采用萘双加酶基因通用引物对萘双加氧酶基因片段进行扩增、测序及分析。结果表明，含有萘的固体平板有清晰透明斑的出现；高效液相检测结果显示，萘被降解成小分子产物，证明液体培养基可富集培养获得萘降解菌群。萘降解菌群16S rRNA测序比对结果显示，富集培养获得菌群分属于5门9纲15目24科31属，共33种细菌。另外共获得萘双加氧酶基因片段11条，GenBank注册号为KY304819-KY304829。系统发育树结果显示，所获萘双加氧酶基因分为4个类群。通过HPLC及双加氧酶基因的分子检测，验证已从准东油田石油污染土壤当中富集培养获得萘降解菌群。 　　关键词：萘降解菌；高效液相色谱；细菌菌群；萘双加氧酶基因；淮东油田 　　中图分类号：Q938.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）19-3726-05 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.201