roTOR反义RNA真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达.pdfVIP

维普资讯 中国医科大学学报 JChinMedUniv 第35卷 第4期 2006年8月 ·337· roTOR反义RNA真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞 中的表达 胡新华，杨军，张志深，刘程伟，刘戈飞，张强 (一{】l蜀医科大学附属第一医院血管外科，辽宁沈阳 110001) [摘要]目的：构建哺乳类动物雷帕霉素靶蛋 白(mTOR)的反义RNA真核表达载体，观察其对血管平滑肌细胞(VSMC)功能 的影响。方法：提取人VSMC总RNA，反转录．聚合酶链反应(RT．PCR)扩增m R基因cDNA序列，经pGEMT·载体克隆后双 酶切，将 cDNA序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGP．C1，构建m R基 因反义RNA真核表达载体。转染VSMC，采用 Westernblot法检验反义表达载体对 mTOR蛋 白表达的影响，流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果：经RTP·CR获得 664bp 产物 ，T我体克隆后 ，经DNA测序，确定该片段为mTOR基 因cDNA，进而构建反义R