免疫组化技术演示课件.pptVIP

② 间接法 间接法也称夹心法，是将酶标记在第二抗体上（第二抗体为抗第一抗体的抗体），形成抗原-第一抗体-第二抗体-HRP复合物，然后进行显色。该法要求第二抗体与第一抗体应是不同种属的动物产物。间接法应用广泛，只需标记一种二抗就可以检测众多相同种属来源的一抗。 * 免疫组化SP法的基本步骤 （1）石蜡切片脱蜡至水。 （2）抗原修复 （3）3% H2O2室温孵育5~10min，以消除内源性过氧化物酶的活性。 （4）蒸馏水冲洗，PBS洗。 （5）5%~10%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10min。倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的第一抗体或即用型第一抗体，37℃孵育2h或4℃过夜。 （6）PBS冲洗，5min×3次。 （7）滴加适当比例稀释的二抗，37℃或室温孵育10~30min。 （8）PBS冲洗，5min×3次。 （9）滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素（PBS稀释）或辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃或室温孵育10~30min。 （10）PBS冲洗，5min×3次。 （11）显色剂显色（DAB或AEC）。 （12）自来水充分冲洗，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，苏木精复染，中性树胶封片。 * 2、非标记抗体免疫酶法 在酶标记抗体过程中可降低部分抗体和酶的活性，使得抗体的效价降低。另外，血清中的非特异性抗体也可被酶标记，引起非特异性背景。非标记抗体免疫酶法是先用酶（