甘薯叶绿体表达载体构建及其融合基因在叶绿体中的瞬间表达.PDFVIP

西北植物学报 ,2009 ,29 (9) :1747 - 1755 Act a B ot . B or eal. Occi dent . Sin. 　　文章编号 (2009) 甘薯叶绿体表达载体构建及其融合 基因在叶绿体中的瞬间表达 1 2 2 2 2 1 王玉华 ,张秀海 ,吴忠义 ,王永勤 ,黄丛林 ,贾敬芬 ( 1 西北大学 生命科学学院/ 陕西省生物技术重点实验室/ 西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室 ,西安 7 10069 ;2 北京 市农林科学院 北京农业生物技术研究中心 ,北京 100097) ( 摘 　要 :利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点 ,根据烟草叶绿体基因组全序列设计引物 ,从甘薯 I p om oea bat at as ) 叶绿体基因组中克隆了2 个相邻的功能基因 rbcL ( GenBank 登录号为 A Y942 199) 和 accD ( GenBank 登录 号为 A Y942200) ,并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段 。以来 自叶绿体基因组的强启动子 Prrn 和 Rp s bAp ro 分别驱动选择标记基因 aa dA 及 p ha Cgf p 融合基因 ,构建成表达盒 p rrnaa dATp s bAt er 与 Rp s bAp ro p ha Cgf p Rp s bAt er ,然后将这 2 个表达盒串联在一起克隆进甘薯叶绿体同源片段中 ,获得甘薯叶绿体定点整合 表达载体 p SCGFP 。酶切分析证明 ,所构建的载体符合预期设计 ;采用该载体对甘薯叶片进行基因枪转化 ,结果显 示 ,p ha Cgf p 融合基因可在叶绿体特异启动子和终止子的调控下在甘薯幼嫩叶片中瞬间表达 ,证明构建的载体 p SCGFP 可用于甘薯叶绿体转化 。 关键词 :甘薯 ;叶绿体同源片段 ;叶绿体表达载体 ;瞬间表达 ; 中长链聚羟基脂肪酸酯 中图分类号 :Q785 文献标识码 :A Construction of Sweet Potato Chloroplast Expression Vector and Transient Expression of p h a Cg f p Fusion Gene in Chloroplast WAN G Yuhua1 ,ZHAN G Xiuhai2 ,WU Zhon gyi2 ,WAN G Yongqin2 , HU AN G Conglin2 ,J IA J ingf en1 ( 1 College of Life Sciences ,Nort hwest U niver sit y / Shaanxi Provincial Key L aboratory of Biot echnology / Key L aboratory of Re source Biology and Biot echnology in West er n China ,Xi ’an 7 10069 ,China ;2 Beij ing AgroBiot echnology Research Cent er ,Beij ing Academy of Agricult ure and Fo