可靠灵敏的全血RNA样本RT-qPCR分析-ThermoFisherScientific.PDFVIP

应用指南 SuperScript IV VILO预混液 可靠、灵敏的全血RNA样本 RT-qPCR分析 简介 大多数商品化的逆转录产品用于难以处理的样本时均效果不 佳，如纯化不佳的RNA、有限的RNA或降解RNA。因此，利用 逆转录实时定量PCR (RT-qPCR) 研究难以处理的样本的基因 表达 (包括全血) 通常十分困难，需要大量优化 [1,2]。由于获得 的血液样本较少，因此只有少量总RNA可用于RT-qPCR [3,4]。 此外，血液样品的采集、保存和处理也会对RNA完整性产生 负面影响 [5,6]。另一项挑战则是提取RNA中存在的内源性物 质，会抑制大多数常用的逆转录酶。这些抑制剂包括heme、 抗凝剂 (如EDTA和肝素) 以及RNA提取物中的残留化学物质 (如异硫氰酸胍) [7]。因此，血液样本中的互补DNA (cDNA) 合 成需要高度稳定且灵敏的逆转录试剂，以生成质量和产量俱 佳的cDNA ，帮助确保获得准确且可靠的RT-qPCR结果。 TM TM TM 我们最近推出了Invitrogen SuperScript IV VILO 预混 液，它是全新配方的第一链cDNA合成预混液，适用于两步法 本应用指南展示了使用SuperScript IV VILO预混液处理低数 RT-qPCR。该预混液包含高合成能力、热稳定性极高且可耐 量和低质量的全血RNA样本，可以实现高效、可靠且灵敏的 TM TM 受抑制剂的Invitrogen SuperScript IV逆转录酶和优化的 cDNA合成，获得高置信度的RT-qPCR结果。 缓冲液，可在RT-qPCR应用中提供高效率、高cDNA产量和高 线性度 (查看 白皮书)。SuperScript IV VILO预混液的反应时 间仅为10分钟，且可在更高的温度下进行cDNA合成，从而实 现具有复杂二级结构的 RNA 的高效逆转录。SuperScript IV VILO预混液减少了移液步骤，有助于科学家提升数据可重复 性、避免污染，同时缩短手动操作时间。 准 材料与方法 标 量 从全血中提取总RNA 子 分 人全血 用 E DTA管采 集 外周 全血，采 集 约 24 小时后，使 用 基 于 A N HeLa总RNA 总RNA R TM TM Invitrogen TRIzol 试剂 (货号 的实验方案纯化 1 2 3 4 5 6 7 总RNA。用Thermo ScientificTM NanoDropTM 分光光度计定量 碱基 总RNA ，然后去除基因组DNA。