临床PCR试剂选用质检.pptVIP

临床PCR试剂盒的选用和质检 卫生部临床检验中心 李金明 PCR或RT-PCR试剂盒的组成 核酸提取试剂 核酸扩增或逆转录-核酸扩增试剂 产物检测试剂（有些使用全自动分析仪的PCR方法因其核酸扩增和检测同时完成，故无专门的产物检测试剂） 影响PCR试剂盒质量的因素 内在因素: 原材料、核酸提取方法、方法学设计 影响PCR试剂盒质量的因素： 扩增所需的原材料 寡核苷酸引物和探针 缓冲液和dNTP 聚合酶、逆转录酶等 PCR反应混合物 寡核苷酸引物和探针 其对试剂盒质量的影响首先是纯度。纯度的判断可根据260/280吸光度比值来判断，如?2.0，则需重新纯化。另一种方法是将其在聚丙烯酰胺凝胶上电泳，如出现一条以上的带或迁移位置错误，则需重新纯化。 是否有污染。 结合特异性（浓度） dNTP和缓冲液 dNTP（包括dATP 、dCTP、 dGTP和 dTTP或 dUTP）的浓度 缓冲液：在储存和扩增循环中稳定、作为聚合酶活性所必须的Mg＋＋（或用于rTth的Mn＋＋）的浓度以及pH等 逆转录酶、DNA聚合酶 酶的浓度 酶的活性 核酸扩增方法 PCR RT－PCR 转录依赖的扩增（TMA） 连接酶链反应（LCR） 链替代扩增（SDA）等 影响PCR试剂盒质量的因素：