畜肉中阿托品山莨菪碱东莨菪碱普鲁卡因和利多卡因的测定.PDFVIP

附件2 畜肉中阿托品、山莨菪碱、东莨菪碱、普鲁卡因和 利多卡因的测定 BJS201711 1 范围 本方法规定了畜肉中阿托品、山莨菪碱、东莨菪碱、普鲁卡因和利多卡因残留量的液相色谱- 串联质谱测定方法。 本方法适用于畜类肌肉组织中阿托品、山莨菪碱、东莨菪碱、普鲁卡因和利多卡因的定性确 证和定量测定。 2 原理 用磷酸盐缓冲溶液提取畜类肌肉组织中阿托品、山莨菪碱、东莨菪碱、普鲁卡因和利多卡因， 提取液经离心、净化后用液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。 3 试剂和材料 以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯，水应为符合GB/T 6682 规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇 （CH OH）：色谱纯。 3 3.1.2 乙腈 （CH CN）：色谱纯。 3 3.1.3 甲酸 （HCOOH）：色谱纯。 3.1.4 乙酸 （CH COOH）：色谱纯。 3 3.1.5 正己烷 （C H ）：色谱纯。 6 14 3.1.6 氢氧化钠 （NaOH）。 3.1.7 磷酸二氢钾 （KH PO ）。 2 4 3.1.8氨水 （NH ·H O）。 3 2 3.2 试剂的配制 3.2.1 氢氧化钠溶液 （200g/L）：称取氢氧化钠 （3.1.6）20g，加适量的水溶解，冷却后加水稀释 至100mL，混匀。 3.2.2 磷酸二氢钾缓冲溶液 （0.1mol/L）：称取磷酸二氢钾 （3.1.7）13.6g，加水溶解至近1000mL， 用氢氧化钠溶液 （3.2.1）调节pH至4.0，加水定容至1000mL，混匀。 3.2.3 甲酸溶液 （2mL/100mL）：移取甲酸 （3.1.3）2mL，加水稀释至100mL，混匀。 3.2.4 氨水甲醇溶液 （2+98）：移取氨水 （3.1.8）2mL，加甲醇 （3.1.1）稀释至100mL，混匀。 3.2.5 乙酸溶液 （0.1mL/100mL）：移取乙酸 （3.1.4）1mL，加水稀释至 1000mL，混匀。 3.2.6 甲酸溶液 （0.1mL/100mL）：移取甲酸 （3.1.3）1mL，加水稀释至 1000mL，混匀。 3.3 标准品 硫酸阿托品、消旋山莨菪碱、氢溴酸东莨菪碱、普鲁卡因和利多卡因标准品的中文名称、英 1 文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量和折算系数见附录A表A.1，纯度均≥98%。 3.4 标准溶液的配制 3.4.1 标准储备液 （100mg/L）：准确称取标准品 （3.3），分别折算成含阿托品、山莨菪碱、东 莨菪碱、普鲁卡因和利多卡因10mg （精确至0.0001g），置于100mL烧杯中，加适量的甲醇（3.1.1） 溶解，并用甲醇转移并定容至刻度，摇匀，配制成浓度为100mg/L标准储备液。置-18 ℃以下冰 箱中保存，有效期6个月。 3.4.2 标准中间液 （1.00 μg/mL）：移取标准储备液 （3.4.1）1.00mL，置100mL容量瓶中，加甲 醇 （3.1.1）定容至刻度，摇匀，配制成浓度为1.00 μg/mL标准工作液。置于4℃~8℃保存，有效期 3个月。 3.4.3 标准工作溶液：临用现配。 3.5 SPE小柱：OasisMCX阳离子交换柱，60mg/3mL，或性能相当者。 4 仪器和设备 4.1 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源 （ESI）。 4.2 均质器。 4.3 高速冷冻离心机：转速≥10000r/min。 4.4 固相萃取装置。 4.5 涡旋混合器。 4.6 超声波清洗器。 4.7 氮气吹干仪。 4.8 电子天平：感量分别为0.01g 和0.000 1g。 4.9pH 计:精度0.01。 5 测定步骤 5.1 试样的制备与保存 取空白或供试肌肉组织，绞碎，并使均质，得空白或试样。 5.2 试样的处理 5.2.1 提取 称取试样5g （精确至0.01g）于50mL 具塞离心管中，加入磷酸二氢钾缓冲溶液 （3.2.2）20 mL ，加盖后涡旋2 min，再超声处理15min， 4℃以下10000r/min 离心15min，上清液倒入另 一离心管中。残渣中再加入缓冲溶液20mL，重复提取一次，合并上清液，滤纸过