牛成纤维细胞库的建立与生物学特性的-研究.pdf

摘 要 本实验采州组织块贴壁培养法，构建了鲁曲黄牛、皮埃蒙特牛有限成纤维细胞系。并对所建 细胞系进行了生物学特性研究与分析。 本实验所培养的细胞具有典型的成纤维形态：所培养细胞早梭形或不规则三角形，有数个长 短不一的突起，细胞丰满；细胞核形态为卵圆形，并位丁胞质中央，核t：清晰。两种牛成纤维细 胞人小不一致，且形态存在差异。对丁-所建细胞系，细胞冻存代数在4代以内，冻存密度为3× 31支。 细胞复苏后活率较冻存前有所F降．这表明细胞在冷冻、复苏过释中可能受到一定的损伤。 但活率均在90％以上。所±镕养细胞在体外的生K增殖过科甲…S’刑，经历了}许伏期、指数增生期 和平顶期三个阶段，符合细胞在体外生I王=的一般规律。 在对所建细胞系进行微生物检测时，我们对细胞污染中常见的细凶、真卤、病毒及支原体污 染进行分析，坌占果均为I掘性，表明培养物术受剑细凶、真菌、病毒及支原体的污染。 对于所建细胞系，尤其是以保种为目的所构建的细胞系，遗传特性的稳定1}常重要。因此对 细胞系遗传稳定性的评估是一项必要的指标。本实验对培养物进行染色体分析得山：通过对鲁西 牛I}占种的Ⅱ二倍体与多倍体的出现率均不超过13％．表明细胞在体外培养时遗传性能稳定；不存 在种间的交义污染。通过对染色体的核型分析，为物种鉴定提供理论依据。 同l：酶分析己被J“泛的麻州丁物种分析．冈此本实验对所建细胞系进行了乳酸脱氢酶(LDH) 与苹果酸脱氢酶(MDH)的酶谱分析，表明不同物种各节现其独特的条带．具有种属特异性。通 过比较研究，得山细胞系之间不存在交义污染的现象。 本实验所构建的成纤维细胞系符合ATCC的要求，成功的构建了两个牛鼎种的有限成纤维细 胞系，达剑了备禽遗传资源在细胞水平上K}{『】保存的目的；并开辟了物种保存的新途径，措建了 我国备禽遗传资源细胞席构建和生物学特性研究的技术平台，为全国备禽遗传资源在细胞水平的 保存和研究提供技术与理论支持：为多方面的科学研究提供了宝贵实验材料。 关键词： 牛 成纤维细胞 核删分析 同I：酶分析 CharacteristicsofCattle Establishmentand Cel1 Lines Fibroblast GuoYu AssociatePro．Lai Directed SongJia by Wei Pro．Guan Jun Abstract 1inesoftheear tissuesofLuxicattleand Thefinitefibroblasteel1 marginal boyinewere constructeddirectadherentcu[turemethods．The Piemontese successfully by toLhe eell1ine． cenlineswere according settingup anatyzed reques￡for fihroblast the Thecultured istypical Throughmicroscope