蝴蝶兰合子和胚的分离-中国细胞生物学学报.PDFVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2012, 34(4): 361–365 http ://www.cj 蝴蝶兰合子和胚的分离 1,2 3 1* 伍成厚 　李冬妹　田惠桥 (1 , 361005; 2 , 510405; 3 , 528300) 厦门大学生命科学学院 厦门 广州市园林科学研究所 广州 顺德职业技术学院 顺德 – 摘要 该文用酶解 振荡法分离蝴蝶兰受精后的胚囊, 然后显微解剖出合子、早期原胚及 0.7%~1.3% 0.6%~1.0% 10% 接近成熟的球形原胚。酶解液由 的纤维素酶、 果胶酶和 甘露醇组成, pH5.8, 酶解时间20~30 min 。分离的蝴蝶兰早期原胚和接近成熟的球形原胚均发现有发达的胚柄 吸器。 ; ; ; ; 关键词 蝴蝶兰 合子 原胚 胚柄吸器 分离操作 受精和胚胎发生是植物发育的一个重要过程, MnSO 0.7 mmol/L 2-N- (MES) 3 mmol/L 4 , 吗啡啉乙磺酸 , , 8%~10%(W/V) 通过一系列的细胞融合、伸长、分裂和分化 完成植 的甘露醇。在基本分离液中, 加入果 物的器官分化。通过分离合子和原胚可以为研究植 胶酶(Serva)和纤维素酶(Onozyka R-10), 配成含酶的 物受精和胚胎发生提供很好的实验材料。被子植物 (pH5.8) 3 (1)0.7% 分离液 。实验进行了 个酶解浓度: 纤 的合子深藏在子房内的胚珠体细胞组织中, 要分离 维素酶+0.6%果胶酶; (2)1.0%纤维素酶+0.9%果胶酶; 合子需要排除胚珠细胞的阻碍, 分离技术相对困难, (3)1.3%纤维素酶+1.0%果胶酶。将不同时期、不同 目前仅在水稻(Oryza sativa)[1] 、玉米(Zea mays)[2] 、小 处理的材料置于微振荡仪上室温酶解。为观察酶解 麦(Triticum aestivum)[3] 、烟草(Nicotiana tabacum)[4] 、 液对珠被细胞分离的效果, 进行酶解振荡0.5, 1, 2, 3 h 蓝猪耳(Torenia fournieri)[5]等少数植物上取得成功。 的时间梯度实验。合子和早期原胚显微解剖前酶解 近年来, 人们结合分子生物学、转基因等技术利用分 –振荡20~30 min, 分离接近成熟的球形原胚不酶解 离的植物早期原胚开展了水稻[6-7] [8] [9] 而是直接进行解剖。之后在倒置显微镜(Leica DM 、玉米 、小麦 、 [10] (Arabidopsis thaliana)[11-12] IRB) 10% 烟草 、拟南芥 等植物的