金霉素生物合成基因簇中调控基因ctcB的功能-微生物学报.PDF

微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 2016, 56(9): 1486-1495 /actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxb Research Paper 研究报告 金霉素生物合成基因簇中调控基因 ctcB 的功能 1 1 2 1 1 2 2 1 1, 2 * 刘佳，朱涛，王鹏飞，孔令新，王松梅，刘运添，谢昌贤，邓子新，由德林 1 上海交通大学生命科学技术学院，微生物代谢国家重点实验室，上海 200240 2 金河生物科技股份有限公司，内蒙古 呼和浩特 010200 摘要： 【目的】研究金霉素产生菌中SARP家族转录调控基因ctcB 的作用。【方法】利用大肠杆菌、链 霉菌的属间接合转移和同源重组双交换的方法，构建ctcB基因缺失突变株。通过cDNA在相邻同转录方 向的基因间隔进行PCR验证，确定金霉素生物合成基因簇中的转录单元。利用荧光定量RT-PCR方法进 行突变株金霉素生物合成基因簇的转录水平检测。随后，生物信息学预测分析了金霉素生物合成基因簇 内CtcB与DNA 的结合位点。【结果】获得了ctcB基因缺失的双交换突变株。发酵结果显示，该突变株失 去产生金霉素与四环素的能力。金霉素生物合成基因簇内有6个共转录单元，其中4个共转录单元在 ctcB基因缺失突变株中转录水平明显下降。软件分析预测到一致性较高的CtcB结合重复序列。【结论】 ctcB正调控金霉素生物合成结构基因ctcG-D 、ctcH-K 、ctcN-P 、ctcW-T 4个转录单元和ctcQ ，为进一步研 究ctcB调控机制奠定了基础。 关键词：金霉素, SARP家族转录调控基因, 基因敲除, 生物合成 金霉素(Chlortetracycline, CTC)作为第1个被发 的延伸，抑制细菌蛋白质的合成，从而发挥抗菌 [4 ] 现的四环素家族成员，于1948年由Duggar从土壤 作用 ，金霉素对多种革兰氏阳性和阴性致病菌 微生物金黄色链霉菌(Streptomyces aureofacines) 有明显抑菌活性，对立克次氏体、支原体、衣原 [ 1] 中分离得到 。金霉素同四环素(Tetracycline, 体和阿米巴原虫亦有作用。由于金霉素在临床和 [5] TC) 、土霉素属第一代四环素类抗生素，它们是 畜牧水产业的广泛应用 ，因此，从50年代就开 [6– 7] [8] 由微生物发酵产生天然产物，而第二、三代四环 展了金霉素产生菌随机诱变