荧光光谱的理与运用.pptVIP

荧光光谱法 概述 基本原理 荧光分析方法 荧光法的应用 荧光 荧光的分类 荧光分析法 荧光光谱法的特点 ①灵敏度高 最低检出限：质量分数10-6~10-9数量级，适用于痕量物质检测 灵敏度比紫外-可见分光光度法约高2~4个数量级 ②选择性好 只要利用单色器控制激发光和荧光的波长，通过前后两次波长的选择，可得到比吸收光度计更强的选择性。 ③应用还不够广泛，尚待拓宽 多数物质本身不会产生荧光，一些物质在加入某种试剂后能够产生荧光；对环境因素（温度，酸度、溶解氧）极为敏感 荧光分析法的基本原理 （1）分子的激发 基态→激发态(S1、S2、激发态振动能级）单重态：分子中所有电子自旋都配对的电子状态三重态：有两个电子的自旋不配对而平行的状态 ①无辐射跃迁 振动弛豫： 由于分子间的碰撞，激发态分子由同一电子能级中的较高振动能级转至较低振动能级的过程，其效率较高。 激发态分子常常首先发生振动驰豫。 内转换： 相同多重态的两个电子能级间，电子由高能级回到低能级的分子内过程。 系间窜越： 激发态分子的电子自旋发生倒转而使分子的多重态发生变化的过程。含有重原子的分子中（如I、Br等），系间窜跃最常见。 外转换： 激发态分子与溶剂或其他溶质相互作用和能量转换而使荧光（或磷光）减弱甚至消失的过程。 荧光强度的减弱或消失，称为荧光熄灭或猝灭。 ②辐射跃迁 荧光： 受光激发的分子经振动驰豫、内转换、振动驰豫到达第一电子激发单重态的最低振动能级，以辐射的形式失活回到基态，发出荧光。 由于无辐射使分子吸收的能量有部分损失，因此荧光的能量比吸收的能量小，即荧光波长一般比激发光波长长。 磷光： 若第一激发单重态的分子通过系间窜跃到达第一激发三重态，再通过振动驰豫转至该激发的最低振动能级，然后以辐射的形式回到基态，发出的光线称为磷光。 由于激发三重态能量较激发单重态低，所以磷光的波长比荧光的波长稍长。 磷光仅在很低的温度或黏性介质中才能观测到。因此磷光很少应用于分析。 3. 荧光产生的过程： （1）处于基态最低振动能级的荧光物质分子受到紫外线的照 射，吸收了和它所具有的特征频率相一致的光线，跃迁到第一电子激发态的各个振动能级； （2）被激发到第一电子激发态的各个振动能级的分子通过 无辐射跃迁降落到第一电子激发态的最低振动能级； （3）降落到第一电子激发态的最低振动能级的分子继续降 落到基态的各个不同振动能级，同时发射出相应的光量子，这就是荧光； （4）到达基态的各个不同振动能级的分子再通过无辐射跃迁最后回到基态的最低振动能级． 4.荧光与结构的关系 电子跃迁类型 ?* → ?的荧光效率高，系间窜跃至三重态的的速率常数较小，有利于荧光的产生。 共轭效应 含有?* → ?跃迁能级的芳香族化合物的荧光最常见且最强。具有较大共轭体系或脂环羰基结构的脂肪族化合物也可能产生荧光。 荧光产生的过程： （1）处于基态最低振动能级的荧光物质分子受到紫外线的照 射，吸收了和它所具有的特征频率相一致的光线，跃迁到第一电子激发态的各个振动能级； （2）被激发到第一电子激发态的各个振动能级的分子通过 无辐射跃迁降落到第一电子激发态的最低振动能级； （3）降落到第一电子激发态的最低振动能级的分子继续降 落到基态的各个不同振动能级，同时发射出相应的光量子，这就是荧光： （4）到达基态的各个不同振动能级的分子再通过无辐射跃迁最后回到基态的最低振动能级． （1）荧光与结构的关系 电子跃迁类型 ?* → ?的荧光效率高，系间窜跃至三重态的的速率常数较小，有利于荧光的产生。 共轭效应 含有?* → ?跃迁能级的芳香族化合物的荧光最常见且最强。具有较大共轭体系或脂环羰基结构的脂肪族化合物也可能产生荧光。 取代基效应：苯环上有吸电子基常常会妨碍荧光的产生；而给电子基会使荧光增强。 平面刚性结构效应 可降低分子振动，减少与溶剂的相互作用，故具有很强的荧光。如荧光素和酚酞有相似结构，荧光素有很强的荧光，酚酞却没有。 （2） 荧光量子产率Φ 物质分子发射荧光的能力用荧光量子产率（Φ）表示： Φ与失活过程的速率常数k有关： 凡是使荧光速率常数kf增大而使其他失活过程（系间窜越、外转换、内转换）的速率常数减小的因素（环境因素和结构因素）都可使荧光增强。 3. 荧光强度与浓度的关系 荧光是物质吸收光子之后发出的辐射，荧光强度（F）与 ①荧光物质的吸光