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手足口病患儿外周血淋巴细胞亚群剖析 　　【摘要】目的 ：检测手足口病患儿外周血淋巴细胞亚群，探讨其免疫功能变化与手足口病发生的关系。方法 ：采用四色荧光标记流式细胞术，检测75例手足口病患儿外周抗凝全血的淋巴细胞亚群：CD3+细胞、CD3+CD4+细胞、CD3+CD8+细胞、CD19+细胞、CD16+56+细胞的相对计数，并以40例健康儿童作为对照组。结果 ：手足口病患儿外周血CD3+细胞、CD3+CD4+细胞（Th）、CD3+CD8+细胞（Ts）、Th/Ts细胞比值以及CD16+56+细胞均明显低于对照组（P＜0.05）；CD19+细胞的百分率显著增高（P＜0.05）。结论 ：手足口病患儿体内存在细胞及体液免疫功能紊乱，病毒感染可能是引起机体免疫功能异常的主要原因。 　　【关键词】手足口病；儿童；淋巴细胞；流式细胞术； 　　【中图分类号】R72【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2014）06手足口病（hand foot and mouth disease ，HFMD）是一种由肠道病毒感染引起的儿童常见的感染性疾病，主要由柯萨奇A组16型（CoxA16）、肠道病毒71型(EV71)感染引起。手足口病主要严重并发症包括脑炎、脑脊髓膜炎、神经源性肺水肿和循环衰竭，严重危害儿童身心健康［1］。本文通过对75例HFMD 患儿进行外周血淋巴细胞亚群测定，以探讨手足口病患儿的免疫功能变化与手足口病发生的关系。 　　1材料与方法 　　1??1研究对象：选择2011年3月－2011年12月在开封市儿童医院传染科住院的HFMD患儿75例，其中男41例，女34例，年龄4个月－13岁，平均2岁4个月。均符合卫生部所制定的手足口病诊断标准［1］。同时随机选择40例同期本院儿科门诊健康体检小儿作对照，男23例，女17例，年龄6个月－10岁，平均2岁6个月。入选标准为既往无过敏史，无自身免疫性疾病、肿瘤、免疫缺陷者，未使用激素和免疫抑制剂，近2周内无任何疾病和不适症状。HFMD患儿组与对照组的年龄、性别比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。 　　1??2试剂与仪器：淋巴细胞亚群检测试剂盒MultiSET购自美国BD公司，仪器为美国BD 公司生产的FACS Calibure流式细胞仪。 　　1??3研究方法：所有患儿及对照组小儿分别采集EDTA-K2抗凝外周血2ml，进行淋巴细胞亚群测定。两组儿童各取50μl抗凝全血分别加入置有相应20μl荧光抗体（CD3/CD4/CD8/ CD45及CD3/CD16+56/CD45/CD19）的专用试管中，混匀，室温暗处避光孵育15min，每管加入450μl 1X溶血素，室温避光孵育15min后，流式细胞仪检测。 　　1??4统计学处理 　　测量数据和图形输入计算机，应用MultiSET软件进行资料处理。两组结果以x_±s表示，用SPSS13.0软件进行分析，P＜0.05具有统计学意义。 　　2结果 　　与对照组儿童相比，手足口病患儿外周血CD3+细胞、CD3+CD4+细胞（Th）、CD3+CD8+细胞（Ts）、Th/Ts 细胞比值、CD16+CD56+细胞均明显下降（P＜0.05）；而两组间CD19+B淋巴细胞的百分率显著增高（P＜0.05），详见表1 　　表1外周血各淋巴细胞亚群检测结果（x_±s） 　　组别例数CD3+（%）CD3+CD4 　　（%）CD3+CD8+ 　　（%）Th/TsCD19+ 　　（%）CD16+CD56+ 　　（%）HFMD 　　组7545.50±10.2627.74±8.8918.35±6.381.34±0.6235.38±7.946.46±3.56对照 　　组4062.59±10.4736.20±6.1824.63±6.742.58±0.7418.48±6.839.97±3.85t7.3255.9373.3622.608-7.4953.078P＜0.01＜0.01＜0.05＜0.01＜0.01＜0.01 　　3讨论 　　 手足口病（Hand foot mouth disease，HFMD）是近年婴幼儿常见的传染病，由肠道病毒引起，临床上以发热和手、足、口腔等部位出现皮疹、溃疡等表现为主，部分患儿可引起无菌性脑膜脑炎、神经源性肺水肿、脑干脑炎等严重致命性并发症。儿童，特别是婴幼儿，是处于生理性免疫低下的状态，特异性及非特异性免疫功能均较成人差，成为病原微生物进攻机体的一个重要突破口，这也可能是手足口病易感于5 岁以下儿童的重要原因。 　　在免疫应答过程中，末梢血淋巴细胞发育分化成为功能不同的亚群：T、B、NK细胞。当亚群的数量和功能发生异常时，就能导致机体免疫紊乱并产生病理变化。尤其是T淋巴细胞以及T淋巴细胞亚群CD3+、CD