微生物遗传第八章微生物遗传与变异.pptVIP

第八章 微生物遗传与变异 第一节 遗传的物质基础 一.证明核酸是遗传物质的经典实验 ①1928年，F. Griffith；1944年O. T. Avery 肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）转化试验。 ②1952年，A. D. Hershy、M. Chase的噬菌体感染实验。 ③1956年，H. Fraenkel-Conrat的TMV拆开和重建实验。 结论： 证明核酸（DNA或RNA）是遗传的物质基础 简单的细菌（或病毒）解决复杂而重大的问题 微生物与高等生物具有共同的遗传本质 质粒 Ⅰ型Compound transposons：两端为IS，抗性基因居中。如Tn5、Tn9、Tn10、Tn4001、Tn4003。 Ⅱ型Complex transposons：两端为IR(30-50bp)，中间为转座基因和抗性基因。如Tn1、Tn3、Tn21、Tn1721、Tn551。 克隆clone 不经过有性细胞的结合，由体细胞发育成新个体，即无性繁殖。 基因重组gene recombination 两个不同来源的遗传物质进行交换，经过基因的重新组合，形成新的基因型的过程。 原核微生物没有有性生殖，其基因重组通过转化、接合、转导方式进行。 F因子 大肠杆菌是有性别分化的。决定它们性别的因子称为F因子(致育因子或称性质粒)，呈超螺旋状态，既可以在细胞内独立存在, 具有自主的与染色体进行同步复制和转移到其他细胞中的能力,也可插入(即整合)到染色体上 F’菌株：Hfr菌株内的F因子因不正常切割而脱离染色体时，形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子，特称为F′因 子。 细胞表面同样有性菌毛。 携带有F’因子的菌株，其性状介于F+与Hfr之间，这就是初生F’菌株。 初生F’菌株与F-菌株接合，使后者转变成F’菌株，这就是次生F’菌株。以这种接合来传递供体菌基因的方式，称为F因子转导(F-duction)、性导(sexduction) 。 在次生的F’群体中，大约有10%的F’因子重新整合到染色体组上，而恢复成Hfr菌。 1952 年Zinder 和 Lederberg 在验证Salmonella typhimurium是否也存在接合现象时发现了转导现象。 S. typhimurium： LT22A (trp-)； LT2(his-) LT22溶原性 →噬菌体P22 → 感染LT2（非溶原性） →可能释放带trp+的P22 →LT22A (trp-) →呈原养型。 局限性转导是噬菌体对寄主特定基因进行的有效转移 溶原菌经诱导后，少数前噬菌体从宿主染色体脱落时产生错误切割，把宿主的某些基因整合到噬菌体的基因组上，当这样的噬菌体侵染另一宿主菌时，噬菌体 DNA 与受体菌的 DNA 同源区段配对，通过双交换而整合到受体菌的染色体组上，使受体菌获得了供体的这部分遗传特性，从而形成转导子。 微生物细胞融合的研究始于1976年。 主要过程：先准备两个有选择性遗传标记的突变株，在高渗溶液中，用适当的脱壁酶去除细胞壁，再将形成的原生质体离心聚集，并加入促融合剂PEG(聚乙二醇)促进融合，然后在高渗溶液中稀释，涂在能使其再生细胞壁或进行分裂的培养基上，待形成菌落后，通过影印接种法，将其接种到各种选择性培养基上，最后鉴定它们是否是重组子。 第七节 微生物与基因工程 ①基因分离： ②体外重组：外源DNA与载体连接 ③载体传递：导入受体，使外源DNA在受体中表达 ④复制、表达 ⑤筛选、繁殖：对重组后的大量重组子性状进行筛选，从中选出所需性状重组子，并使之稳定繁殖。 过程 1）自发性 2）不对应性 3）稀有性 4）规律性 三、基因突变的机制 5）独立性 6）可诱变性 7）遗传性 8）可逆性 1、基因突变的特点： 基因突变自发性和不对应性的实验证明： 野生型 （原始性状） 特定环境 突变型 （适应环境的新性状） 驯化 定向诱变 筛选 ？ ？ ？ 突变的原因 ？ 一种观点认为，突变的原因和突变的性状间是相对应的，并认为这就是“定向变异”、“驯化”。 另一种观点认为，基因突变是自发的。 三个经典实验 变量实验、涂布实验、影印实验 1943年S. E. Luria与M. Dlbruck进行了Fluctuation test 1949年H. B. Newcombe的Respreding plated incubacion 1952年J. Lederberg夫妇用Replica- plating结束了争论 证明突变的性状与引起突变 的原因间无直接对应关系！ 如何证明基因突变的自发性