新型生物复合材料-HA2fZrO2梯度复合材料对骨髓间充质干细胞生长与成骨分化的影响.pdf

摘要 因创伤、感染、肿瘤等各种原因造成的骨缺损、骨不愈合一直是骨科治疗领域的难 题。常用的自体和异体骨移植各有自身难以克服的缺点，不能常规用于临床。随着组织 工程的迅猛发展,为骨缺损修复提供了新的思路和治疗途径。 构建理想的的组织工程化骨其前提就是要有生物学特性良好的种子细胞和适合的 支架材料, 支架材料的选择是组织工程所需考虑的关键问题之一。理想的骨组织工程的 支架材料应该满足以下几个条件: (1) 良好的生物相容性。(2) 生物可降解吸收性以及 吸收速率的可调性。(3) 一定的机械强度和韧性,在特定的部位能提供与局部环境相适 应的结构上的支持作用。(4) 易于加工、塑行以便临床用。(5) 具有三维内联多孔结构， 种子细胞的黏附生长以及周围组织的长入决定了材料必须具备完备适宜的多孔性,包括 一定的空隙率、孔径大小以及完善的内连接系统。(6) 材料表面有利于细胞黏附生长、 分化。目前在骨组织程中常用的支架材料主要有生物陶瓷、羟基磷灰石(HAP)、人工可 降解聚合物等，而多种成分的复合型支架材料的逐渐成为研究热点。 本单位与上海大学高分子材料研究所合作采用干铺-烧结的方法联合研制了一种新 型生物复合材料―HA/ZrO 梯度复合材料 (Graded irconia-hydro xyap at- ite 2 composite bioceramic)。使氧化锆材料的高强度、高韧性和HA的生物活性有机地结合 起来。根据国际标准化组织ISO10993-1:1992医疗器械生物学评价标准和要求，本课题 组已对HA/ZrO 梯度复合材料进行了一系列体内外实验研究，前期研究发现HA/ZrO 梯度 2 2 复合材料具有良好的骨诱导性和骨传导性，无细胞毒性、无急性体内毒性、不致溶血性， 生物相容性和免疫相容性良好，成骨效能优，能够与骨界面形成良好的生物连接。 骨组织工程中的种子细胞要求其扩增迅速,与支架材料有良好的相互作用,骨髓间 充质干细胞(MSCs) ,因其可通过体外贴壁培养分离,扩增迅速,是一类具有分化潜能的细 胞,在特定条件下可以分化为多种组织细胞,如成骨细胞、软骨细胞、肌腱、脂肪细胞、 成纤维细胞以及神经星状细胞等,且具有极强的自我复制能力, 是一种理想组织工程种 子细胞。以骨髓间充质干细胞和HA/ZrO 梯度复合材料复合构建的组织工程化骨有望成为 2 未来骨组织工程研究和应用的主流。 组织工程学的重要研究内容之一是支架材料对种子细胞生物学行为的影响。目前 HA/ZrO 梯度复合材料对MSCs 生长及分化的影响尚未得到充分阐明。本研究旨在详细阐 2 I 万方数据 述作为支架材料的HA/ZrO 梯度复合材料对于种子细胞MSCs 生长及成骨分化等生物学行 2 为的影响，为未来的相关应用提供数据参考。 实验分3 个部分进行观察研究： 1.骨髓的获取及MSCs 的分离培养。用密度梯度离心法进行MSCs 的原代分离培养、 消化传代，绘制 MSCs 的生长曲线及倍增时间。同时进行相关实验内容的检测分析包括 MSCs 的成骨诱导分化、Vonkossa 染色、碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶（ALP）活性测定、 总RNA 提取及RT-PCR。 2. HA/ZrO 复合材料颗粒对骨髓间充质干细胞的增殖及成骨分化的影响。以不同浓度 2 的材料悬液作用于骨髓间充质干细胞，5 天后进行MTT 检测。15 天后进行碱性磷酸酶活 性测定、Voncossa 染色、总RNA 提取及RT-