医学细胞因子联合高效扩增高纯度人外周血来源nk细胞并观察其细胞功能的变化.pdfVIP

·论著· 细胞因子联合高效扩增高纯度人外周血 来源NK细胞并观察其细胞功能的变化 李晓红 马健 吴晓雄 汪菲菲 李猛 达万明 于力 高春记 【摘要】 目的探索从人外周血中分选及扩增高纯度NK细胞的方法，并初步了解扩增后的NK 细胞功能的变化。方法 采用免疫磁珠分选系统(miniMAcs)阴性分选法，从外周血单个核细胞 (PBMNC)中获得纯化的NK细胞，在干细胞培养慕条件下，通过IL一2、IL—12和IL-15等细胞凶子的不 同组合，分别培养15d，每3d半量换液并补允细胞凶子；检测分选及扩增前后NK细胞cD3一CI)56+ 细胞含量、扩增倍数及扩增前后各组NK细胞穿孔素、颗粒酶BmRNA的表达水平及IFN一^y的分泌水 平。结果经minjMAcs阴性免疫磁珠分选后CD3一CD56+细胞含量由分选前的(11．2±5．2)％提高 到(94．2±3．5)％。培养15d后除对照组CD3一CD56+细胞纯度略下降外，j￡余组与扩增前无明显差 两种基因的表达量均显著高于其他组(JpO．01)，但两组lhJ比较差异尤统汁学意义(Po．05)；各细 胞因子组培养液中IFN—Y分泌水平均甚著高于未加细胞因子的空白对照组(P0．01)，IFN一1分泌水 平IL．2十IL．12+IL一15组IL-2+IL—12组IL．2十IL．15组IL—2组(尸0．01)。结论经miniMACS 免疫磁珠阴性分选法获得少量NK细胞后，应用IL一2+IL—15细胞凶子联合培养是获得纯度高、细胞毒 活性强、扩增效率高的NK细胞的简单有效方法。 细胞 【关键词】杀伤细胞； 白细胞介素2； 白细胞介素12； 白细胞介素15；干扰素-1； 扩增 onexViVo NK∞llsfhmhuman and Study expa哪ionofhighlypuri行ed periphe嘲bIoodchang鹤in theirfuncti伽 “爿i∞一幻昭，M4l，如n，彤(／x玉z‘)一打昭，黝，vG^■i毋i，Ⅳ批愕，删体么n—mi愕，yU厶， GAt)Chun蕊Ce舭rt玎HeMl“ogy，PLA＆玳r越Hosp汪文，4t愕i00853，ChtM co唧ondi昭Ⅱ眦胁r：甜O饥“n书，E啪甜：血机氏^@，卯．com To the mefhodof NKcellsfmmhuman objec“ve periph- 【Abst憎ct】 expIoreexpansion highpurity eralbl()()(1and the in fhn(：ti(Jns()fNK(!f：llsafterexvivo NK explorePhangesbi(l‘西‘：al expansjon．T订ethods ceU— ce儿swereisolaLedfromperipheralbloodmononuclearceUs(PBMNCs)bvusingminiMACS(Magnetic NK in stemCell CelIlsoIatjonKitⅡ，andculturedS(：扎M(stemIine selection)and HematopoietirExpansjon with10％humanABsemmanddjⅡ0renlcombinationsof Medium，Si舯a)supplementetl