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银杏黄酮分离纯化 工艺研究 班级： 生技 学号： 姓名： 本文研究了银杏叶中总黄酮的分离纯化工艺采用柱层析法，以硅胶作为吸附介质，对影响分离纯化银杏黄酮的影响因素进行了单因素实验和正交优化实验的研究。确定了银杏叶总黄酮的最佳分离纯化工艺参数。以芦丁为标准品，黄酮回收率作为考察指标，实验结果表明：上样浓度为0.180mg/ml，洗脱剂配比(石油醚:乙醇=9:1)，洗脱流速为1.0ml/min。 近年来，随着国内、外对植物化学物研究和应用的逐渐广泛深入，银杏叶中的总黄酮己被证实为具有药用价值和较高保健作用的有效活性成分，日益得到重视，具有极大的研究价值和开发潜力。 银杏又名公孙树，为银杏科银杏属植物。银杏叶中黄酮类化合物含量较高，为2.5%~5.91%，主要含有黄酮和银杏内酯等有效成分，其中银杏黄酮具有扩张血管，增加脑血管流量，降低脑血管阻力，改善脑血管循环功能，保护脑细胞，免受缺血损害扩张冠状动脉；防止心绞痛及心肌梗塞，抑制血小板活化因子、抗氧化，防止血栓形成，清除有害的氧化自由基，提高免疫力和调血脂等药理作用[1]。对治疗心脑血管疾病，增加冠状动脉血流量，及治疗脑缺血、脑老化、老年痴呆症哮喘等有独特疗效。国内外相继有银杏叶黄酮新药投入市场。 图1.1 黄酮类化合物的结构图 黄酮类化合物(flavonoids)主要是指基本母核2-苯基色原 (2-Phenyl- chromone)类化合物，现在则是泛指两个苯环(A-与B-环)通过中央碳链相互联结而成的一系列化合物。其中，黄酮醇类(flavonol)化合物是在黄酮本母核3位上连有轻基或其他含氧基团。目前从银杏叶中分离得到的黄酮类合物有35种之多，已明确结构的有20种，其结构式可归为六种(具体见图1.1)。 目前一些市场上销售的银杏类产品： 银杏叶为银杏科植物银杏的干燥叶。银杏叶中药用成分重要包括：银杏黄酮(flavonoids)、菇内酷、聚异戊烯醇、有机酸、银杏酸等，其中银杏黄酮和菇内醋含量较大，其效用也被广为认可。银杏黄酮具有捕获游离基、清除活性氧、促进血液循环、治疗肝中毒、抗肿瘤活性及脑代谢等功能。另外银杏叶还含有39种营养及功能成分，这其中包括:蛋白质、糖、维生素C、维生素E、胡萝卜素、18种氨基酸、25种矿物质营养微量元素，其中钙、磷、硼、硒含量较高，其他如人体所需的铁、氟、铜、锰、锌、铬等含量也较丰富。其中维生素C、维生素E、胡萝卜素、硒、锌、铜等作为营养性抗氧化剂与非营养性抗氧化剂一银杏黄酮、菇内醋、儿茶素、多酚类等对保护机体不受自由基所致的氧化和损伤发挥着重要的作用。 使用大功率聚能式中间探入超声换能器能在更短的时间得到更高的提取效率，郭国瑞等以水为介质，测得该法是常规水浸提效率的3倍左右。超声波提取法省时、高效、节能、且属绿色提取技术，具有广泛的应用前景。为此，以银杏叶为研究原料，总黄酮为指标成分，对其所含的总黄酮成分进行提取、分离纯化及含量测定，以使其物质基础明确、质量稳定可控、使用检测方便，能作为功能性基料使用进行工业化生产，开发相应的保健食品，供应市场。 银杏黄酮定量分析 黄酮类化合物的测定方法有薄层扫描法、紫外分光光度法、液相色谱法等。 (1)色谱法薄层扫描法 多于测定银杏中芦丁含量。具有取样量少、分离效果好、结果准确的特点。景仁忠、陈波(1997年)采用此法测定了苦荞叶中芦丁的含量。高效液相色谱法(HPLC):多用于苦荞及其制品中芦丁含量的测定的特点，样品多采用不同浓度的甲醇、乙醇直接提取，也有经柱层层析分离等方法。 (2)分光光度法 由于A13+仅与黄酮类物质有特征反应，因此直接加硝酸铝。采用分光光度法测定银杏叶提取液中总黄酮含量。利用银杏黄酮母核上有3-OH/5-OH，B环上有邻苯二羟基,可与A13+在碱性溶液中显色的原理测定其含量。常见有NaNO2-Al(NO3)3法和AlCl3分光度法。陈运中 [15](1998年)采用此法以NaNO2-Al(NO3)3法和AlCl3—索氏抽取苦荞麦粉总黄酮，在波长500nm处比色，测定了荞麦黄酮含量。 薄层扫描法、液相色谱法测定银杏叶提取液中总黄酮的含量都比较繁琐，非黄酮类物质干扰比较大。 本文为此，选取紫外分光光度法，方法简单快速，通过绘制芦丁标准曲线，再通过计算来测定分离提取的银杏黄酮总含量。 紫外分光光度法其分析原理为:其他的试剂与银杏黄酮类物质有特征反应，但是与银杏黄酮类物质中的组分呈现的颜色差别比较大，而铝盐与银杏黄酮类物质的特征显色比较一致,氯化铝或硝酸铝与银杏黄酮类物质生成的络合物多为黄色(最大波长为500nm)，可用于银杏黄酮类物质的定性及定量分析。 银杏黄酮定性分析 对于银杏黄酮的定性分析方法很多显微鉴别法、一般化学反应法、紫外光谱法、交流示波极谱法和层析法。 (1)显微鉴别法 显