第15章DNA损伤与修复-课件.pptVIP

烷基化碱基的直接修复 无嘌呤位点的直接修复 DNA嘌呤插入酶能催化游离嘌呤碱基或脱氧核苷与DNA嘌呤缺如部位重新生成糖苷共价键，导致嘌呤碱基的直接插入。具有很强的专一性。 单链断裂的直接修复 DNA连接酶能够催化DNA双螺旋结构中一条链上缺口处的5?-磷酸基团与相邻片段的3?-羟基之间形成磷酸二酯键，从而直接参与部分DNA单链断裂的修复，如电离辐射所造成的切口。 二、切除修复是最普遍的DNA损伤修复方式 碱基切除修复 核苷酸切除修复 碱基切除修复（base excision repair） ① 识别水解：DNA糖基化酶特异性识别DNA链中已受损的碱基并将其水解去除，产生一个无碱基位点； ② 切除：在此位点的5?端，无碱基位点核酸内切酶将DNA链的磷酸二酯键切开，去除剩余的磷酸核糖部分； ③ 合成：DNA聚合酶在缺口处以另一条链为模板修补合成互补序列； ④ 连接：由DNA连接酶将切口重新连接，使DNA恢复正常结构 核苷酸切除修复（nucleotide excision repair） ① 首先，由一个酶系统识别DNA损伤部位； ② 其次，在损伤两侧切开DNA链，去除两个切口之间的一段受损的寡核苷酸； ③ 再次，在DNA聚合酶作用下，以另一条链为模板，合成一段新的DNA，填补缺损区； ④ 最后由连接酶连接，完成损伤修复。 E.coli的NER主要由4种蛋白质组成： UvrA UvrB UvrC UvrD 人类的DNA损伤核苷酸切除修复 ① 首先由损伤部位识别蛋白XPC和XPA等，再加上DNA复制所需的SSB，结合在损伤DNA的部位； ② XPB、XPD发挥解旋酶的活性，与上述物质共同作用在受损DNA周围形成一个凸起； ③ XPG与XPF发生构象改变，分别在凸起的3′-端和5′-端发挥核酸内切酶活性, 在增殖细胞核抗原（PCNA）的帮助下，切除并释放受损的寡核苷酸； ④ 遗留的缺损区由聚合酶δ或ε进行修补合成； ⑤ 最后，由连接酶完成连接。 着色性干皮病（XP）是第一个与DNA损伤修复缺陷有关的人类疾病，可累及各种族人群。患者细胞存在UV照射后DNA损伤修复功能缺陷，患者的皮肤部位缺乏核酸内切酶，不能修复被紫外线损伤的皮肤的DNA，因此在日光照射后皮肤容易被紫外线损伤，先是出现皮肤炎症，继而可发生皮肤癌。 患者发生皮肤癌的可能性非常高。XP是常染色体隐性遗传病，具有遗传异质性。缺陷基因编码的蛋白都参与DNA的切除修复。XPA、XPB、XPC、XPD、XPE、XPF、XPG、XPH NER不仅能够修复整个基因组中的损伤，而且能拯救因转录模板链损伤而暂停转录的RNA聚合酶，即参与转录偶联修复（transcription-coupled repair）。 作用方式：NER蛋白质被募集于暂停的RNA聚合酶。 转录偶联修复的意义：将修复酶集中于正在转录DNA，使该区域的损伤尽快得以修复。 碱基错配修复（ mismatch repair） 错配是指非Watson-Crick碱基配对。 碱基错配修复也可被看作是碱基切除修复的一种特殊形式，主要负责纠正： ① 复制与重组中出现的碱基配对错误； ② 因碱基损伤所致的碱基配对错误； ③ 碱基插入； ④ 碱基缺失。 E.coli错配修复系统修复复制差错 Dam甲基化酶（methylase）使E.coli处于暂时的半甲基化状态，标记母链和新合成的DNA链，帮助新合成的DNA链被错配修复系统识别并修复。 模板链的GATC序列甲基化 MutH仅切割新合成的DNA链 MSH（MutS homologs）蛋白 与MutL同源的MLH和PMS蛋白 真核细胞错配修复系统即无MutH蛋白，也无半甲基化标记母链。 错配修复系统利用冈崎片段连接前的DNA缺口辨别错配碱基所在的DNA链。 真核细胞核苷酸修复错配系统： 三、DNA严重损伤时需要重组修复 同源重组修复 ：参加重组的两段双链DNA在相当长的范围内序列相同（＞/=200bp），保证重组后生成的新区序列正确。 非同源末端连接的重组修复 ：哺乳动物修复方式。 同源重组修复 四、某些修复发生在跨越损伤DNA的复制事件之后 重组跨越损伤修复 合成跨越损伤修复 重组跨越损伤修复 SOS修复中LexA-RecA操纵子的作用机制 常见的DNA损伤修复途径 修复途径 修复对象 参与修复的酶或蛋白 光复活修复 嘧啶二聚体 光复活酶 碱基切除修复 受损的碱基 DNA糖基化酶、无嘌呤嘧啶核酸内切酶 核苷酸切除修复 嘧啶二聚体、DNA螺旋结构的改变 大肠杆菌中UvrA、UvrB、UvrC和UvrD，人XP系列蛋白XPA、XPB、XPC……XPG等 错配修复 复制或重组中的碱基配对错误 大肠杆菌中的MutH、MutL、Mut