原位PCR技术教学幻灯片.pptVIP

第十章 原位PCR技术 ; 原位杂交技术的优点是组织形态保存好，特异性较高，成本低，不需特殊仪器。缺点是敏感性较低，但可通过改变检测手段的敏感性，或经原位核酸扩增后再行标记探针检测（间接原位PCR法）来提高检测效率。; 近年来，随着现代工业和分子生物学技术的飞速进步，核酸水平的原位检测方法也同样得到了长足发展，新技术、新方法层出不穷，除原位杂交和原位PCR外，又出现诸如：荧光原位杂交（FISH）；寡核苷酸引物原位DNA合成技术（PRIN）和比较基因组杂交技术（CGH）——第九章； ; 组织和细胞芯片技术（又叫微阵列技术（microarray technology）——第十一章；等等。限于时间，本次课只讨论第十章“ 原位PCR”技术，因为它多用，又与其它新方法有关联。其它章节内容，仅供同学们选用时参考。 ; 根据实验设计，原位PCR可分为直接法、间接法、原位反转录、原位再生或序列复制反应等类型。 ;第一节 原位PCR技术操作 ; 载盖玻片的清洁和组织切片的预处理，包括防脱片、蛋白酶消化等，基本上与原位杂交法类同。 ; 配制0.05%/0.01 mol/L Tris-Hcl，pH8.0多聚赖氨酸，每10ml 0.05%多聚赖氨酸中加入1μl TritonX-100,可保存于4℃，出现浑浊则不能使用。; 清洁的玻片置上述液体中