第七章外源化学物致突变作用8-2课件.ppt

骨髓多染红细胞微核试验 大多数类型的细胞都可形成微核，但有核细胞的胞质少，微核与正常核叶及核的突起难以鉴别。 常规：骨髓多染红细胞微核试验 　　　多染红细胞是成红细胞发展为成熟红细胞时，主核已排出，微核仍保留在细胞质中，成为多染红细胞（polychromatic erythrocytes PCE）,这些细胞保持其嗜碱性约24小时，然后成为正染红细胞，并进入外周血。 　　　计数骨髓有微核多染红细胞率可判断受试物对骨髓细胞的染色体损伤作用。 微核实验进展 体外微核试验：中国仓鼠肺细胞/中国仓鼠卵巢细胞/中国仓鼠成纤维细胞，易于操作和控制受试物浓度。 外周血微核实验：可能成为人群观察化学毒物遗传毒性的一种手段。 双核细胞法：提高微核的灵敏度。 免疫荧光染色法、荧光原位杂交：灵敏度高，还可判断来源（断片还是染色体）。 (三)染色体畸变分析chromosome aberration assay 观察染色体形态结构和数目改变，又称细胞遗传学试验。 观察：用显微镜检查细胞分裂中期相染色体畸变和染色体分离异常。 结果：裂隙，断裂，断片，微小体，染色体环等。 常染色体异常 Down syndrome (trisomy 21):先天愚型或唐氏综合征 三体综合征（13三体）：严重的眼，脑，循环系统缺陷以及腭裂。儿童生活很少超过几个月。 (四)姐妹染色单体交换试验(sister-chromatid exchange,SCE) 指染色体同源座位上DNA复制产物的相互交换,其频率与DNA断裂和修复有关。检测DNA损伤的灵敏指标。 原理： 在细胞培养液中加入5-溴脱氧尿嘧 啶（5-BrdU，嘧啶类似物），在 DNA合成期可与胸苷竞争掺入DNA 中，经两个分裂周期后，两条染色 单体，其中一条DNA链的双链内T 被5-溴脱氧尿嘧啶核苷取代，另一 条只有一条链被取代。用染色剂处 理，使双链含BrdU的染色单体着色 浅淡，单链含BrdU的染色单体着色 深。当姐妹染色单体间发生同源片 段交换时，就可以根据每条染色单 体夹杂着深浅不一的着色片段加以 区分。 (五)果蝇伴性隐性致死试验  原理　　根据隐性基因在伴性遗传中的交叉遗传特征，即雄蝇的X染色体传给F1代雌蝇。又通过F1代传给F2代雄蝇。位于X染色体上的隐性基因能在半合子雄蝇中表现出来。据此推断致死突变的存在。 结果： 　　能检出点突变，小缺失，重排。 优点：判断突变终点客观、不需活化。 不足：与哺乳动物差异较大。 (六)显性致死试验 1. 原理 对雄性动物染毒，观察一个精子发育周期中各个阶段雌鼠出现受精卵在着床前死亡和胚胎早期死亡。 致突变物引起哺乳动物生殖细胞染色体发生结构和数目变化。 2.检测整体哺乳动物生殖细胞遗传性（染色体畸变）损伤的方法。是评价化学毒物对雄性动物的生殖细胞遗传毒性较好的方法之一。 不足：灵敏度差，动物数量大，一定的受孕率。 （七）程序外DNA合成试验(unschedule DNA synthesis， UDS) 当DNA受损伤时，损伤修复的DNA合成主要在S期以外的其他细胞周期，称程序外DNA合成 **。 原理：观察分离或培养的细胞，加入标记DNA合成原料，如3H-胸苷，测定S期以外3H-胸苷掺入胞核的量，判断受试物是否造成DNA损伤。因此发现UDS增高，即表明DNA发生过损伤。 * (八)单细胞凝胶电泳试验(single cell gel electrophoresis，SCGE)（彗星试验(comet assay)） 一种快速检测哺乳动物细胞DNA损伤的实验方法。 原理：DNA损伤后，断裂的DNA片段比大片段DNA迁移的更快，电泳后出现彗星状，即可判断DNA损伤。 细胞DNA不同损伤程度的彗星电泳图 根据“彗星”尾部占头部的大小百分比将细胞损伤分为： 0 - 无损伤 5% Ⅰ- 轻度损伤 5%-20% Ⅱ- 中度损伤 21%-40% Ⅲ- 重度损伤 41%-95% Ⅳ- 完全损伤 95% 几种遗传毒理学试验的哺乳动物性细胞致突变物筛检可靠性评价 试 验 灵敏性(%) 特异性(%) 准确性(％) Ames试验 17/19 (89%) 3/10 (30%) 20/29 (69%) 骨髓细胞染色体畸 18/18 (100%) 2/10 (20%) 20/28 (71%) 变试验或微核试验 显性致死试验 18/18 (100%) 8/10 (80