环介导等温扩增技术快速检测转crylA基因抗虫水稻、棉花的-研究.pdf

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O.5mmol/Lofeachouter F3andB3.3.0mmol/Lofeachinner FIFand primers primers DNA 0mM 0 BIP,2.5pL凰f polymerasebuffer(20mM%s-HCl(pH8.8,250C),1KCl,1 mM X-l mmol/L mmol/Lof mM(NI-h)2S04,2MgS04,0.1%TritonOO),0.5 Mg十,1.5 each of8UBstDNA 50 the deoxynucleosidetriphosphate,0.7pL polymerase,andng DNA.Themixturewasincubatedat650Cfor60minina blockandthen target heating heatedat800Cfor2mintoterminatethereaction.TheIA^但fordetectionoftheGM cottonwascarriedoutina oftotalreactionissameasrice 1.0mmol/L 25“L except Mg什, and5mrnol/L were ina size dNTPs.LAN口products 2%agarose electrophoresed gel.The ofthe ofthe fragmentLAMP isin withthe ladderlike productgoodagreementpredicted size. ThedetectionlimitsofPCRandLAMP theDNA extracted assaysusing templates withCTABmethodwere0.1%and0.0 IAMP wasfoundtobe 1%.respectively.Theassay 1O.foldmoresensitivethanthe仃aditionalPCR addition.thereweredifferent assay.In threekindsofnon-GM kindsof ofnon-GM samples(contain rice,three cotton,twokinds kindsofnon—GM 3kindsof Btstrains soybcan,two tomato,and positive containingcrylA bedetected PCRandI.AMP inordertoevaluatethe of gene)to by respectively

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