珊瑚色诺卡氏菌CGMCC41037全细胞催化RS-氟苯甘氨酸去消旋.PDF

　第２９卷 第４期 分　　子　　催　　化 Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．４　 　２０１５年８月 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＭＯＬＥＣＵＬＡＲＣＡＴＡＬＹＳＩＳ（ＣＨＩＮＡ） Ａｕｇ．　２０１５　 文章编号：１００１３５５５（２０１５）０４０３０７０８ 珊瑚色诺卡氏菌ＣＧＭＣＣ４．１０３７全细胞催化（ＲＳ）４ 氟苯甘氨酸去消旋化为（Ｓ）４氟苯甘氨酸 夏仕文，熊文娟，韦燕婵，何从林，徐红梅 （重庆邮电大学 生物信息学院，重庆４０００６５） 摘要：珊瑚色诺卡氏菌ＣＧＭＣＣ４．１０３７全细胞能够催化４氟苯甘氨酸的（Ｒ）对映体立体反转为（Ｓ）对映体，相反 方向的反应不能发生．研究了反应条件对（Ｒ）４氟苯甘氨酸立体反转的影响．在最优反应条件下，５ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｒ） ４氟苯甘氨酸和１０ｍｍｏｌ／Ｌ（ＲＳ）４氟苯甘氨酸分别立体反转和去消旋化为（Ｓ）４氟苯甘氨酸，产率为５２％和 ６３％，ｅｅ为９９．５％和９９．２％．（ＲＳ）４氟苯甘氨酸的去消旋化过程是通过珊瑚色诺卡氏菌ＣＧＭＣＣ４．１０３７全细胞 中的两个酶催化反应实现的．（Ｒ）氨基酸氧化酶催化（Ｒ）４氟苯甘氨酸氧化脱氨形成４氟苯甲酰甲酸，（Ｓ）氨基 酸转移酶催化４氟苯甲酰甲酸转氨化为（Ｓ）４氟苯甘氨酸．讨论了４氟苯甘氨酸两个对映体的代谢途径． 关键词：珊瑚色诺卡氏菌ＣＧＭＣＣ４．１０３７；立体反转；去消旋化；（ＲＳ）４氟苯甘氨酸；（Ｓ）４氟苯甘氨酸 中图分类号：Ｑ８１４．１；Ｏ６４３．３ 文献标志码：Ａ 　　非天然（Ｓ）氨基酸是已经上市的和正在研发 颤菌血红蛋白（ＶＨｂ）组成的融合蛋白．利用融合蛋 ［１］ 的许多手性药物的关键中间体 ．在众多的酶催化 白和重组河流弧菌 转氨酶体系，以苯乙胺为氨 ω 制备方法中，（Ｒ）氨基酸氧化酶与化学还原剂或其 授体，在异辛烷／磷酸盐缓冲液（１∶１，ｖ／ｖ）两相体 他酶如（Ｓ）氨基酸脱氢酶或（Ｓ）氨基酸转移酶的 系中，５００ｍｍｏｌ／Ｌ底物转化为４８５ｍｍｏｌ／ＬＬ氨基 组合体系，能够将反应过程中消旋氨基酸的（Ｒ）对 ［１０］ 丁酸，收率９７％，ｅｅ＞９９％．Ｃｈｅｎ等 采用重组变 映体氧化脱氢为 亚氨基酸中间体或 亚氨基酸 异三角酵母（Ｒ）氨基酸氧化酶／伯克霍尔德氏菌 α α （ 水解产生的α酮酸原位转化为消旋氨基酸或直接 Ｓ）氨基酸转移酶体系，实现了（ＲＳ）氨基３［３ 转化为（Ｓ）对映体，通过循环拆分或立体反转实现 ｛６（２甲基苯基）｝吡啶基］丙酸的去消旋化．（Ｓ） 消旋氨基酸的去消旋化，从而实现非天然（Ｓ）氨基 氨基３［３｛６（２甲基苯基）｝吡啶基］丙酸的收率 － ［１１］ ［２５］ 和ｅｅ分别为８５％和９９．５％．Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ等 组合通 酸的高收率和高对映选择性制备 ．Ｆｏｔｈｅｒｉｎｇｈａｍ ［６］ 等 以产重组（Ｒ）氨基酸氧化酶全细胞／钯碳甲 过单点突变产生的纤细红酵母（Ｒ）氨基酸氧化酶 酸铵组合体系催化 １００ｍｍｏｌ／Ｌ消旋２氨基丁酸去 的突变酶Ｍ２１３Ｇ和大肠杆菌Ｌ天冬氨酸