甜菜BetaVulgarisL-生物化学与生物物理进展.PDF

/cn/ch/common/create_pdf.aspx?file_nolag=1 发布日期：2008-11-3 发布日期：2008-11-3 生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and 甜菜( Beta Vulgaris L )叶绿体转化体系建立及抗虫 和抗除草剂植株的获得* 1) 1,2) 3)** 1) 崔 杰 李滨胜 杨 谦 程大友 （1）哈尔滨工业大学食品科学与工程学院 哈尔滨 150090; 2)黑龙江省森林植物园 哈尔滨 150040; 3) 哈尔滨工业大学生命科学与工程系 哈尔滨 150001) 摘要 为建立外源基因甜菜叶绿体转化体系，利用分子生物学方法构建了包含有编码苏云金芽孢杆菌晶体蛋白基因 Bt cry1Ac 和编码膦丝菌素乙酰转移酶 bar 基因的甜菜叶绿体转化载体 pSKARBt/bar ，以甜菜叶绿体基因组中atpB/rbcL 做同源片段，以 甜菜叶绿体 16S 启动子和终止子为调控基因，以 bar 基因为筛选标记基因. 基因枪法转化甜菜叶柄，经筛选获得抗性转基因 植株. 对转基因植株进行外源基因 Bt cry1Ac 和 bar 的PCR 检测、Southern blot 分析，结果表明：外源基因 Bt cry1Ac 和 bar 确已导入到甜菜叶绿体基因组中. 转基因植株除草剂抗性鉴定及其离体叶片虫试鉴定结果表明：转基因植株具有较强的杀虫 活性和抗除草剂特性，表达了相应的蛋白. 研究结果还表明：bar 基因在植物叶绿体转化中，既可以用作抗性基因，又可用 作转化体筛选的标记基因. 建立了甜菜叶绿体转化体系. 关键词 甜菜；叶绿体转化；Bt 基因；bar 基因； 同质化 学科分类号 Q78 Q81 甜菜是我国重要的糖料作物，近年来在大面积生产中常常遭受虫害和草害的威胁，严重影响甜菜产量 [1] ；虫害威胁更为严重，有时是灾难性的，因此， 和质量. 2000年因草害造成东北甜菜主产区减产达10%以上 迫切需要选育抗虫、草甜菜新品种. 采用常规育种手段因抗性种质资源匮乏难以解决此问题，基因工程技 术与常规育种方法相结合选育抗除草剂、抗虫甜菜新品种切实可行，具有重要的现实意义和商业价值. 草丁膦(glufosinate)是非选择性、广谱除草剂Liberty 的活性成分，属于有机磷类除草剂，商业用名还有 Basta 、PPT等. L-草丁膦能强烈抑制细菌和植物的谷氨酰胺合成酶（GS ）活性，导致细胞内氨含量迅速积 累，直接抑制光系统及其反应，减少跨膜pH梯度，使光合磷酸化解偶联，叶绿体结构解体，最后整个植物 体死亡. 将编码膦丝菌素乙酰转移酶( PAT) 的bar基因转化植物，PAT使PPT 的自由氨基乙酰化，从而对PPT 解毒，使之不能抑制GS 的活性，转化植株可正常生长. 此外，有研究证实，bar基因在植物基因工程研究中 [2] [3] [4] 也可用作筛选标记基因，如周钟信等 、Kerry等 、Maughan等 的研究分别成功地获得了转基因的烟草和 水稻. 在基因工程研究中，以高效、无毒的非抗生素抗性基因作为筛选标记基因进行叶绿体转化，可以解除 目前人们对食用转基因食品带来的安全性问题以及对环境带来潜在的威胁的担忧. 叶绿体转化体系的优势 是通过来源于叶绿体的同源片段将外源基因定点整合到植物的叶绿体基因组中，通过叶绿体的多拷贝性实 现外源基因的高效表达，通过母系遗传方式将外源基因传给子代，具有环境安全性等. Bt基因是研究最深入、应用最广泛的基因，目前已在烟草、水稻、棉花和玉米等多种作物上转化并获得 *黑龙江省科技攻关重点项目（GB05B104 ）和国家自然基金）资助项目 **通讯联系人. Tel: 0451-864