生物催化氯苯基-戊二腈去对称性水解合成光学纯巴-微生物学报.PDF

徐美珍 等/生物催化3-(4-氯苯基)-戊二腈去对称性水解合成光学纯巴氯芬的关键前体 31 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology January 25, 2013, 29(1): 31−40 /cjbcn ©2013 Chin J Biotech, All rights reserved 工业生物技术 生物催化3-(4-氯苯基)-戊二腈去对称性水解合成光 学纯巴氯芬的关键前体 1 2 1 2 2 1 2 徐美珍 ，任杰 ，龚劲松 ，董文玥 ，吴洽庆 ，许正宏 ，朱敦明 1 江南大学医药学院制药工程研究室，江苏 无锡 214122 2 中国科学院天津工业生物技术研究所 工业酶国家工程实验室，天津 300308 徐美珍, 任杰, 龚劲松, 等. 生物催化 3-(4-氯苯基)-戊二腈去对称性水解合成光学纯巴氯芬的关键前体. 生物工程学 报, 2013, 29(1): 31−40. Xu MZ, Ren J, Gong JS, et al. Biocatalytic desymmetric hydrolysis of 3-(4-chlorophenyl)-glutaronitrile to the key precursor of optically pure baclofen. Chin J Biotech, 2013, 29(1): 31−40. 摘 要: 研究了利用生物催化剂制备 (S)-4-氰基-3-(4-氯苯基)- 丁酸。以3-(4-氯苯基)- 戊二腈为底物，采用苯 酚- 次氯酸钠法对实验室保藏的菌株进行筛选，得到一株产物立体选择性较高的菌株赤霉菌 Gibberella intermedia WX12 ，并对其催化特性和发酵条件进行了初步研究。以30 g/L 的乳糖和20 g/L 的蛋白胨分别为碳、 氮源，发酵培养96 h ，收集的菌体在50 mmol/L 磷酸缓冲液 (pH 8.0) 中30 ℃催化反应24 h ，将3-(4-氯苯基)- 戊二腈转化为4-氰基-3-(4-氯苯基)-丁酸，产率为90 ％。将产物化学转化为巴氯芬，手性HPLC 分析表明水解 产物构型是 (S) ，其对映异构体过量值ee ＞99 ％。该产物可以用来合成光学纯的 (R)-和(S)- 巴氯芬。 关键词: 腈水解酶，3-(4- 氯苯基)- 戊二腈，4- 氰基-3-(4- 氯苯基)- 丁酸，巴氯芬 Received: September 3, 2012; Accepted: December 3, 2012 Supported by: National Basic Research Program of China (973 Program) (No. 2011CB710801), Tianjin Municipal Science Technology Project (No. 09ZCKFSH01000). Corresponding author: Zhenghong Xu. Tel/Fax: +86-510 E-mail: Zhenghxu@ Dunming Zhu. Tel: +86-22 Fax: +86-22 E-mail: zhu_dm@ 国家重点基础发展计划 (973 计划) (No. 2011CB710801) ，天津科技计划项目 (No. 09ZCKFSH01000) 资助。 32 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Ch