《赛拓实时荧光定量PCR讲座版》-精选课件.pptVIP

* * 阳性参比荧光 以固定的浓度存在于PCR Master Mix中，不参与扩增，信号强度只与取用多少有关。 校正方式：Rn = RReporter/ RROX 作用：消除用枪操作误差、管盖厚度等光学误差，减少孔间、批间差异，提高数据重现性和精确度。 * * TaqMan数据的ROX校正效果 * * 实时定量PCR数据处理 * * 绝对定量和相对定量的定义 绝对定量 目的是测定未知样品的准确拷贝数或浓度，需要已知准确拷贝数或浓度的标准品，需要制作标准曲线，数据处理比较方便，容易理解。 相对定量 不需要测定未知样品的准确拷贝数或浓度，只需要知道样品之间的浓度比值。所以，标准品可以是已知准确拷贝数或浓度的标准品，但是，最常用的方法是通过稀释目的基因的PCR产物作为标准品；标准品可有可无。数据处理相对复杂，比较难理解。 * * 绝对定量数据处理举例 * * 标准曲线法相对定量举例 * * 标准曲线法相对定量举例 目的基因 (pg total RNA) 目的基因的相对表达量（内参校正前） 内参 (pg total RNA) 目的经内参校正后的相对表达量 相对于0小时时目的基因的表达量（内参校正后） 0hr 1032 1 52,152